| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-24页 |
| ·免疫系统对抗原的免疫应答反应 | 第12-14页 |
| ·抗原的限制性呈递途径 | 第12页 |
| ·抗原呈递细胞 | 第12-14页 |
| ·B淋巴细胞 | 第13页 |
| ·巨噬细胞 | 第13页 |
| ·树突细胞 | 第13-14页 |
| ·抗原交叉呈递 | 第14页 |
| ·现阶段广泛使用疫苗的种类及其相关特性 | 第14-21页 |
| ·减毒活疫苗 | 第14-15页 |
| ·灭活的完整的微生物体疫苗 | 第15页 |
| ·亚单位疫苗 | 第15-16页 |
| ·处于研究阶段的新型疫苗及其特性 | 第16-18页 |
| ·减毒活病毒为载体的疫苗 | 第16-17页 |
| ·以减毒细菌作为载体的疫苗 | 第17页 |
| ·以无毒细菌和真菌作为载体的疫苗 | 第17-18页 |
| ·核酸疫苗 | 第18-21页 |
| ·核酸疫苗的特性 | 第18-19页 |
| ·质粒DNA疫苗 | 第19-20页 |
| ·线性DNA疫苗 | 第20页 |
| ·DNA疫苗的免疫途径 | 第20-21页 |
| ·酿酒酵母表达系统及其免疫作用 | 第21-23页 |
| ·酿酒酵母表达系统 | 第21页 |
| ·酿酒酵母表达系统的优缺点 | 第21-22页 |
| ·酿酒酵母免疫佐剂活性的作用机制 | 第22-23页 |
| ·酿酒酵母为载体的APCs範向的核酸疫苗的前景与意义 | 第23页 |
| ·本文的研究目标 | 第23-24页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第24-31页 |
| ·材料 | 第24-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·试剂和酶 | 第25页 |
| ·仪器和设备 | 第25-26页 |
| ·主要缓冲液 | 第26页 |
| ·引物 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-31页 |
| ·质粒DNA的小量抽提 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第28页 |
| ·大肠杆菌的快速转化 | 第28页 |
| ·鲑鱼精carrier DNA的制备 | 第28-29页 |
| ·酿酒酵母Y33感受态细胞制备及转化 | 第29-30页 |
| ·酿酒酵母Y33感受态细胞制备 | 第29页 |
| ·酿酒酵母Y33的转化 | 第29页 |
| ·酿酒酵母总DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·酿酒酵母转化子的鉴定 | 第30-31页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第31-40页 |
| ·酿酒酵母-哺乳动物表达载体pYES2-CMV-BGH-GFP的构建 | 第31-34页 |
| ·pcDNA3.1-GFP哺乳动物盒式表达元件的PCR扩增 | 第31页 |
| ·质粒pYES2/NTA酶切酶切及目的片段回收 | 第31-32页 |
| ·PCR产物和酶切载体进行非限制克隆及鉴定 | 第32-34页 |
| ·酿酒酵母-哺乳动物表达质粒pYES2-CMV-BGH-HA的构建 | 第34-36页 |
| ·载体pYES2-CMV-BGH-GFP和质粒pcDNA3.1-HA的酶切 | 第34页 |
| ·载体片段和HA目的片段的连接转化及重组质粒的鉴定 | 第34-36页 |
| ·酿酒酵母哺乳动物质粒pYES2-CMV-BGH-eGFP的构建 | 第36-38页 |
| ·载体pYES2-CMV-BGH-GFP和质粒pcDNA3.1-eGFP的酶切 | 第36-37页 |
| ·载体片段和eGFP目的片段的连接转化及重组质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| ·酿酒酵母Y33的重组质粒的转化及转化子的鉴定 | 第38-40页 |
| ·PYES2-CMV-BGH-HA 和 pYES2-CMV-BGH-eGFP 转化酿酒酵母Y33及总DNA的抽取 | 第38页 |
| ·酿酒酵母Y33转化子的PCR鉴定 | 第38-40页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第40-46页 |
| ·酿酒酵母-哺乳动物表达载体的构建 | 第40页 |
| ·酿酒酵母菌株和酿酒酵母-大肠杆菌穿梭载体改造 | 第40-46页 |
| ·大肠杆菌-酿酒酵母穿梭质粒载体抗性基因的去除 | 第41-42页 |
| ·酿酒酵母菌株的改造以去除自身的2μ质粒 | 第42-43页 |
| ·酿酒酵母自选择系统的构建 | 第43页 |
| ·以提高质粒DNA入核效率的酿酒酵母胞内组装的携带质粒DNA的功能性VLPs系统 | 第43-44页 |
| ·酿酒酵母-哺乳动物RNA复制子载体的构建 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
