| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第9-24页 |
| 1.1 大豆花叶病毒(SMV)的介绍 | 第9-10页 |
| 1.2 大豆对SMV抗性基因的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.3 反式作用小干扰RNA及其在植物抗病毒中的研究与应用 | 第14-19页 |
| 1.3.1 小RNA诱导的基因沉默机制及其应用 | 第14-15页 |
| 1.3.2 反式作用小干扰RNA的产生及应用 | 第15-18页 |
| 1.3.3 小RNA在植物中的转移 | 第18-19页 |
| 1.4 发根农杆菌转化方法的研究与应用 | 第19-21页 |
| 1.5 本论文的研究思路 | 第21-24页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第24-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 实验材料及来源 | 第24-25页 |
| 2.1.2 各种生化试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-41页 |
| 2.2.1 tasiRNA的引物设计 | 第26-27页 |
| 2.2.2 克隆tasiRNA-GmNH23基因片段 | 第27-28页 |
| 2.2.3 入门载体pENTR-tasiRNA-GmNH23的构建 | 第28-30页 |
| 2.2.4 双元表达载体pKGWRR-tasiRNA-GmNH23的构建 | 第30页 |
| 2.2.5 发根农杆菌介导的大豆毛根转化 | 第30-34页 |
| 2.2.6 大豆根组织的荧光检测 | 第34页 |
| 2.2.7 大豆根组织中GmNH23相对表达量检测 | 第34-36页 |
| 2.2.8 大豆叶片组织中GmNH23相对表达量和SMV-N1滴度检测 | 第36页 |
| 2.2.9 转基因本氏烟草GmNH23-O_x的鉴定 | 第36-40页 |
| 2.2.10 大豆和烟草叶片组织中基因的瞬时表达 | 第40-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-65页 |
| 3.1 干扰GmNH23的tasiRNA重组表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.2 本氏烟草中证明GmNH23对TMV的抗性 | 第42-50页 |
| 3.2.1 本氏烟草17wt中验证tasiRNA对GmNH23的沉默效果 | 第42-45页 |
| 3.2.2 本氏烟草rdr6 silence中验证tasiRNA的干扰作用 | 第45-47页 |
| 3.2.3 转基因本氏烟草GmNH23-O_x中验证GmNH23对TMV的抗性 | 第47-50页 |
| 3.3 本氏烟草中证明GmNH23对SMV的抗性 | 第50-54页 |
| 3.3.1 本氏烟草17wt中验证GmNH23对SMV的抗性 | 第50-53页 |
| 3.3.2 转基因本氏烟草GmNH23-O_x中验证GmNH23对SMV的抗性 | 第53-54页 |
| 3.4 大豆中的瞬时表达系统中证明GmNH23的抗SMV功能 | 第54-58页 |
| 3.4.1 合丰55号大豆中验证GmNH23的抗SMV功能 | 第54-57页 |
| 3.4.2 科丰1号大豆中验证GmNH23的抗SMV功能 | 第57-58页 |
| 3.5 通过大豆毛根转化体系表达tasiRNA验证GmNH23对SMV的抗性 | 第58-65页 |
| 3.5.1 大豆毛根转化体系的建立 | 第58-61页 |
| 3.5.2 毛根转化后大豆根组织的GmNH23相对表达量分析 | 第61-62页 |
| 3.5.3 毛根转化后大豆感染SMV-N1后GmNH23的相对表达量和SMV滴度 | 第62-65页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第65-67页 |
| 4.1 tasiRNA干扰GmNH23的表达 | 第65-66页 |
| 4.2 GmNH23具有抗SMV和TMV的功能 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 附录 | 第71-78页 |
| 附录Ⅰ本实验所用的载体图谱 | 第71-73页 |
| 附录Ⅱ本实验所用的培养基及试剂的制备 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读硕士期间取得的成果 | 第79页 |
