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H1N2亚型猪流感病毒进化分析及抗HA蛋白单克隆抗体的制备

摘要第1-9页
Abstract第9-13页
第一章 引言第13-23页
   ·SIV 的历史和流行现状第13-14页
   ·H1N2 亚型SIV 的历史和流行现状第14页
   ·SIV 病毒的基因组特性第14-15页
   ·SIV 病毒蛋白的特性第15-18页
     ·血凝素蛋白(HA)第15-16页
     ·神经氨酸酶(NA)第16页
     ·聚合酶蛋白(Polymerse)第16-17页
     ·基质蛋白(MP)第17页
     ·非结构蛋白第17-18页
   ·流感病毒诊断方法第18-22页
     ·病毒分离鉴定第18页
     ·流感病毒的血清学诊断方法第18-20页
     ·流感分子生物学诊断方法第20-21页
     ·单克隆抗体技术在流感监测中的优点及应用第21-22页
   ·本研究的目的和意义第22-23页
第二章 病毒全基因序列的测定及遗传演化分析第23-40页
   ·材料第23-24页
     ·试验用病毒株第23页
     ·鸡胚第23页
     ·主要试剂第23页
     ·主要仪器第23-24页
     ·菌种第24页
     ·引物设计第24页
   ·方法第24-29页
     ·病毒分离及有限稀释克隆纯化第24页
     ·红细胞凝集(HA)试验第24-25页
     ·红细胞凝集抑制(HI)试验第25页
     ·病毒核酸的提取第25页
     ·基因的 RT-PCR 扩增第25-26页
     ·PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳第26页
     ·PCR 产物回收和纯化第26页
     ·大肠杆菌DH5а的制备第26-27页
     ·目的基因DNA 产物的连接与转化第27页
     ·阳性重组质粒的筛选第27页
     ·重组质粒的PCR 鉴定第27-28页
     ·质粒DNA 纯化第28页
     ·质粒DNA 测序第28-29页
     ·序列拼接与分析第29页
   ·结果与分析第29-39页
     ·PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳第29-31页
     ·SW/TJ/1/07 和SW/HeB/10/04 全序列分析第31-32页
     ·SW/HeB/10/06 和SW/TJ/1/07 的HA 基因遗传进化分析第32-33页
     ·SW/HeB/10/06 和SW/TJ/1/07 的NA 基因遗传进化分析第33-34页
     ·SW/HeB/10/06 和SW/TJ/1/07 的内部基因进化分析第34-38页
     ·SW/HeB/10/06 和SW/TJ/1/07 的HA1 蛋白氨基酸序列分析第38-39页
   ·讨论第39-40页
第三章 抗SIV 病毒HA 蛋白的单克隆抗体的制备第40-48页
   ·材料与方法第40-44页
     ·细胞、实验动物及试剂第40页
     ·试剂配制第40-41页
     ·抗原的制备第41页
     ·动物免疫第41页
     ·细胞制备第41-42页
     ·细胞融合第42页
     ·阳性杂交瘤细胞的筛选第42-43页
     ·阳性杂交瘤细胞的克隆第43页
     ·单克隆抗体的大量制备第43页
     ·HI 和ELISA 实验第43页
     ·Western-blotting 分析第43页
     ·单抗的交叉反应性实验第43-44页
     ·单克隆抗体的亚型鉴定第44页
   ·结果第44-47页
     ·抗原制备第44页
     ·筛选出两株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞第44页
     ·单抗和SW/HeN/11/05 的HI 和ELISA 效价第44-45页
     ·单抗的交叉反应性实验第45-46页
     ·两株单克隆抗体的Western-blotting 分析第46-47页
   ·讨论第47-48页
第四章 结论第48-49页
参考文献第49-55页
致谢第55-56页
作者简介第56页

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