| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 一、目前所用抗疟药物作用机制 | 第12-14页 |
| (一)青蒿素类药物的抗疟机制 | 第12-13页 |
| (二)喹啉类药物的抗疟机制 | 第13-14页 |
| 二、疟原虫蛋白及其应用 | 第14-15页 |
| (一)作为传播阻断疫苗靶抗原的疟原虫蛋白 | 第14页 |
| (二)疟原虫相对特异的作为疟疾诊断靶点的蛋白 | 第14-15页 |
| (三)作为药物作用靶点的疟原虫蛋白 | 第15页 |
| 三、pLDH的特性 | 第15-17页 |
| 四、pLDH在疟疾诊断中的应用 | 第17-18页 |
| 五、pLDH抑制剂的研究概况 | 第18-19页 |
| 第二章 PfLDH基因的克隆与测序 | 第19-26页 |
| 一、材料和试剂 | 第19-20页 |
| (一)虫株:恶性疟原虫海南株FCC1/HN由本所疟疾室提供。 | 第19页 |
| (二)菌株与质粒 | 第19页 |
| (三)主要试剂 | 第19页 |
| (四)主要仪器 | 第19-20页 |
| 二、实验方法 | 第20-23页 |
| (一)引物设计 | 第20页 |
| (二)恶性疟原虫基因组DNA的提取 | 第20页 |
| (三)PCR扩增 | 第20-21页 |
| (四)目的片段的克隆 | 第21-23页 |
| 三、结果 | 第23-24页 |
| (一)PfLDH基因的扩增 | 第23页 |
| (二)重组质粒的酶切鉴定 | 第23-24页 |
| (三)PfLDH的DNA序列分析 | 第24页 |
| 四、讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 PfLDH基因在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第26-41页 |
| 一、材料和试剂 | 第26页 |
| (一)菌株与质粒 | 第26页 |
| (二)主要试剂 | 第26页 |
| 二、实验方法 | 第26-33页 |
| (一)融合表达载体pGEX/PfLDH的构建 | 第27-28页 |
| (二)融合蛋白的诱导表达 | 第28页 |
| (三)融合蛋白的SDS-PAGE检测 | 第28-30页 |
| (四)融合蛋白的Westernblotting检测 | 第30-31页 |
| (五)目的蛋白的纯化 | 第31-33页 |
| 三、结果 | 第33-39页 |
| (一)融合表达载体pGEX/PfLDH的构建 | 第33-34页 |
| (二)融合蛋白的SDS-PAGE检测 | 第34-35页 |
| (三)融合蛋白的Westernblotting检测 | 第35-36页 |
| (四)表达的目的蛋白的纯化 | 第36-39页 |
| 四、讨论 | 第39-41页 |
| 第四章 PfLDH基因表达产物的免疫学及酶学活性测定 | 第41-47页 |
| 一、材料 | 第41页 |
| 二、实验方法 | 第41-43页 |
| (一)抗PfLDH多克隆抗体的制备 | 第41-42页 |
| (二)ELASA测定 | 第42页 |
| (三)Western blotting检测 | 第42页 |
| (四)PfLDH的酶学活性测定 | 第42-43页 |
| 三、结果 | 第43-45页 |
| (一)PfLDH的免疫学活性测定 | 第43-44页 |
| (二)PfLDH的酶学活性测定 | 第44-45页 |
| 四、讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 中药提取物对PfLDH酶活性的抑制 | 第47-53页 |
| 一、材料和试剂 | 第47页 |
| 二、实验方法 | 第47-49页 |
| (一)基于96孔板的筛选平台 | 第47页 |
| (二)对PfLDH具有抑制作用的重要成分筛选 | 第47-49页 |
| 三、结果 | 第49-51页 |
| (一)高通量筛选平台的建立 | 第49-50页 |
| (二)中药粗提物对重组PfLDH蛋白的抑制作用 | 第50-51页 |
| (三)葛根各部位对重组PfLDH蛋白的抑制作用 | 第51页 |
| 四、讨论 | 第51-53页 |
| 第六章 PfLDH抑制性中药成分体外抗疟效果评价与疟疾感染状况检测 | 第53-58页 |
| 一、材料和试剂 | 第53页 |
| 二、实验方法 | 第53-55页 |
| (一)疟原虫对中药提取物的体外敏感试验 | 第53页 |
| (二)斑点免疫酶渗滤法检测 | 第53-55页 |
| 三、结果 | 第55-56页 |
| (一)疟原虫对中药提取物的体外敏感试验 | 第55页 |
| (二)疟疾感染状况检测 | 第55-56页 |
| 四、讨论 | 第56-58页 |
| 结语 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 附录 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
