| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-11页 |
| 缩略词 | 第11-13页 |
| 1 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 肝癌研究进展 | 第13-16页 |
| 1.1.1 肝癌流行病学调查 | 第13-14页 |
| 1.1.2 肝癌的监测和诊断 | 第14-15页 |
| 1.1.3 肝癌分期和预后评估 | 第15-16页 |
| 1.2 泛素化研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.1 E3 泛素连接酶在TGFβ通路中的作用 | 第16-17页 |
| 1.2.2 E3 泛素连接酶在MAPK通路中的作用 | 第17-18页 |
| 1.2.3 E3 泛素连接酶在PI3K通路中的作用 | 第18-19页 |
| 1.2.4 E3 泛素连接酶在WNT通路中的作用 | 第19页 |
| 1.3 泛素化在肿瘤中的作用 | 第19-21页 |
| 1.3.1 在DNA损伤中的作用 | 第20页 |
| 1.3.2 在细胞缺氧反应中的作用 | 第20-21页 |
| 1.3.3 在G2/ M细胞周期检查点的作用 | 第21页 |
| 1.4 泛素连接酶PRAJA1 的研究进展 | 第21-23页 |
| 2 研究目的、研究内容、技术路线 | 第23-25页 |
| 2.1 研究目的 | 第23页 |
| 2.2 研究内容 | 第23-24页 |
| 2.3 技术路线 | 第24-25页 |
| 3 实验试剂,耗材及仪器 | 第25-34页 |
| 3.1 细胞株 | 第25页 |
| 3.2 菌株及载体 | 第25页 |
| 3.3 实验试剂及药品 | 第25-26页 |
| 3.4 试剂配制 | 第26-32页 |
| 3.5 仪器设备 | 第32-34页 |
| 4 实验方法 | 第34-48页 |
| 4.1 免疫组织化学 | 第34-35页 |
| 4.2 目的基因的克隆及表达载体构建 | 第35-41页 |
| 4.2.1 PCR扩增反应体系及反应程序 | 第35页 |
| 4.2.2 DNA产物纯化 | 第35-36页 |
| 4.2.3 回收琼脂糖凝胶中的DNA | 第36-37页 |
| 4.2.4 DNA产物及载体的酶切 | 第37页 |
| 4.2.5 DNA酶切产物及载体酶切产物的连接 | 第37页 |
| 4.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| 4.2.7 转化大肠杆菌的方法 | 第38页 |
| 4.2.8 质粒的小量提取方法 | 第38-39页 |
| 4.2.9 大量提取质粒的方法 | 第39-41页 |
| 4.3 细胞培养 | 第41页 |
| 4.3.1 细胞复苏 | 第41页 |
| 4.3.2 细胞传代 | 第41页 |
| 4.3.3 细胞冻存 | 第41页 |
| 4.4 细胞转染 | 第41-42页 |
| 4.5 稳定细胞株的构建 | 第42-44页 |
| 4.5.1 慢病毒包装 | 第42页 |
| 4.5.2 嘌呤霉素最佳浓度优化筛选 | 第42-43页 |
| 4.5.3 慢病毒感染及筛选的方法 | 第43页 |
| 4.5.4 含杀稻瘟菌素S抗性哺乳动物稳转株筛选 | 第43-44页 |
| 4.6 BCA法测定蛋白的浓度 | 第44页 |
| 4.7 蛋白免疫印迹(Western blot) | 第44-45页 |
| 4.8 MTS法检测细胞增殖 | 第45页 |
| 4.9 克隆形成实验 | 第45页 |
| 4.10 细胞划痕实验 | 第45-46页 |
| 4.11 裸鼠成瘤实验 | 第46页 |
| 4.12 加药实验 | 第46-48页 |
| 4.12.1 药物筛选 | 第46页 |
| 4.12.2 药物剂量依赖分析 | 第46页 |
| 4.12.3 药物时间过程分析 | 第46-47页 |
| 4.12.4 过表达及敲除细胞系中加药测增殖 | 第47-48页 |
| 5 结果与分析 | 第48-57页 |
| 5.1 PRAJA1 在肝癌组织中的表达以及生存分析 | 第48-49页 |
| 5.2 过表达及敲除细胞系的建立 | 第49页 |
| 5.3 PRAJA1 对肝癌细胞增殖能力的影响 | 第49-50页 |
| 5.4 PRAJA1 对肝癌细胞克隆形成的影响 | 第50-51页 |
| 5.5 PRAJA1 对肝癌细胞迁移能力的影响 | 第51-53页 |
| 5.6 抗肿瘤药物的筛选及对肝癌细胞增殖能力的影响 | 第53-54页 |
| 5.7 敲除PRAJA1 对肝癌细胞成瘤能力的影响 | 第54-55页 |
| 5.8 Label-free定量蛋白质组学分析 | 第55-57页 |
| 6 讨论 | 第57-59页 |
| 7 结论与展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录 | 第67-69页 |
| A 作者在攻读硕士学位期间所发表的文章目录 | 第67-68页 |
| B 学位论文数据集 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
