| 第一部分 文献综述 | 第1-20页 |
| (一) RNA干涉的研究进展 | 第8-16页 |
| 1 RNAi研究历史 | 第8-10页 |
| 2 RNAi的可能机制 | 第10-12页 |
| 3 RNAi涉及的因子 | 第12-14页 |
| ·双链RNA(double-stranded RNAs) | 第12-13页 |
| ·小的干涉RNA(small interferenced RNAs) | 第13页 |
| ·stRNAs(small temporal RNAs) | 第13页 |
| ·MicroRNAs | 第13页 |
| ·RNA诱导的基因沉默复合物(RISC：RNA-induced silencing complex) | 第13-14页 |
| ·siRNA、miRNA与RISC的相互作用 | 第14页 |
| ·RNA诱导的转录后基因沉默起始复合物(RITS：RNA-induced initiation of transcriptional gene silencing) | 第14页 |
| 4 RNA干涉的特点 | 第14-15页 |
| 5 RNAi在植物功能研究中的应用 | 第15-16页 |
| 6 利用RNAi研究植物功能采用的方法 | 第16页 |
| (二) Γ-TUBULIN的研究进展 | 第16-18页 |
| 1 γ微管蛋白的特性 | 第16-18页 |
| 2 γ-微管蛋白的功能 | 第18页 |
| (三) 本实验的意义 | 第18-20页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第20-38页 |
| (一) 实验材料及试剂 | 第20-25页 |
| 1 植物材料、菌株及所用质粒载体 | 第20页 |
| 2 酶、抗生素、各类试剂及试剂盒 | 第20页 |
| 3 PCR引物由上海生工公司合成 | 第20-21页 |
| 4 培养基 | 第21-22页 |
| 5 常用抗生素的配制及使用浓度 | 第22页 |
| 6 质粒提取溶液 | 第22-23页 |
| 7 基因组DNA提取溶液 | 第23页 |
| 8 RNA提取溶液 | 第23页 |
| 9 转膜、杂交主要溶液 | 第23-24页 |
| 10 感受态细胞制备、蓝白筛选溶液 | 第24页 |
| 11 其他常用缓冲液 | 第24页 |
| 12 主要实验仪器 | 第24-25页 |
| (二) 实验方法 | 第25-38页 |
| 1.烟草总RNA的提取和γ-tubulin部分cDNA片段的克隆 | 第25-26页 |
| 2.将γ—tubulin的克隆连接到PMD18载体上及检测 | 第26-29页 |
| 3.dsRNA载体的构建及转化 | 第29-32页 |
| 4.叶盘法转化烟草 | 第32-35页 |
| 5 转基因烟草的斑点杂交鉴定 | 第35-36页 |
| 6.电镜扫描： | 第36-37页 |
| ·仪器 | 第36页 |
| ·步骤 | 第36-37页 |
| 7.TL11,TL3 siRNA的提取 | 第37-38页 |
| 第三部分 结果与讨论 | 第38-57页 |
| (一) 实验结果 | 第38-54页 |
| ·烟草总RNA的提取和γ—tubulin部分cDNA片段的克隆 | 第38-39页 |
| ·将γ—tubulin的克隆连接到PMD18载体上及检测 | 第39页 |
| ·dsRNA载体的构建及转化 | 第39-44页 |
| ·叶盘法转化烟草 | 第44-54页 |
| (二) 讨论 | 第54-57页 |
| 第四部分 小结与展望 | 第57-59页 |
| 1、小结 | 第57-58页 |
| 2、展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
