| 摘要 | 第1-4页 |
| SUMMARY | 第4-9页 |
| 第一篇 文献综述 胸膜肺炎放线杆菌的研究进展 | 第9-21页 |
| 0 前言 | 第9-10页 |
| 1. App 的生物学特性 | 第10-11页 |
| ·生理生化特性 | 第10页 |
| ·血清型 | 第10-11页 |
| 2. App的诊断方法的研究进展 | 第11-13页 |
| ·血清学诊断方法 | 第11-13页 |
| ·补体结合试验 | 第11页 |
| ·间接血凝试验 | 第11页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第11-12页 |
| ·乳胶凝集试验 | 第12页 |
| ·凝集和协同凝集试验 | 第12页 |
| ·其它的检测方法 | 第12页 |
| ·展望 | 第12-13页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第13页 |
| 3. App 的主要毒力因子的研究进展 | 第13-16页 |
| ·溶血外毒素 | 第14-15页 |
| ·荚膜多糖 | 第15-16页 |
| ·脂多糖 | 第16页 |
| ·外膜蛋白 | 第16页 |
| ·其他毒力因子 | 第16页 |
| 4. App的溶血外毒素Apx的分子致病机理研究进展 | 第16-17页 |
| 5. App的疫苗研究进展 | 第17-21页 |
| ·全细菌灭活苗 | 第18页 |
| ·亚单位疫苗 | 第18-19页 |
| ·弱毒活疫苗 | 第19-20页 |
| ·胸膜肺炎ghosts疫苗 | 第20页 |
| ·展望 | 第20-21页 |
| 第二篇 研究报告 胸膜肺炎放线杆菌apxIA和apxIIIA基因的克隆及其原核表达 | 第21-40页 |
| 1 前言 | 第21-22页 |
| 2 材料 | 第22-23页 |
| ·菌种和质粒 | 第22页 |
| ·酶和试剂 | 第22-23页 |
| ·仪器与设备 | 第23页 |
| 3. 方法 | 第23-30页 |
| ·DNA 的提取 | 第23页 |
| ·apxIA 和apxIIIA 基因的扩增 | 第23-24页 |
| ·引物的设计与合成 | 第23页 |
| ·PCR 扩增 | 第23-24页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第24页 |
| ·apxIA 和apxIIIA 基因的克隆 | 第24-25页 |
| ·PCR 产物与pMD18-T 载体的连接 | 第24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·连接产物的转化 | 第24-25页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第25-26页 |
| ·质粒的小量制备 | 第25页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第26-28页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·apxIA 和apxIIIA 基因片段的扩增 | 第26-27页 |
| ·目的片段与pET-28a 载体的酶切回收 | 第27页 |
| ·apxIA 和apxIIIA 基因片段与表达载体的连接与转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第28页 |
| ·表达产物的检测 | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第28-29页 |
| ·Western-blotting 分析 | 第29页 |
| ·pET-apxIA 的表达蛋白产物的初步纯化 | 第29-30页 |
| 4. 结果 | 第30-37页 |
| ·PCR 产物的电泳结果 | 第30页 |
| ·apxIA 和apxIIIA 基因的克隆与鉴定 | 第30-33页 |
| ·重组质粒的电泳、PCR及酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的序列分析 | 第31-33页 |
| ·重组表达载体的构建及鉴定 | 第33-35页 |
| ·apxIA 和apxIIIA 目的基因片段的获得 | 第33页 |
| ·重组表达载体的构建及质粒的鉴定 | 第33-35页 |
| ·表达产物的检测 | 第35-36页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 电泳 | 第35页 |
| ·Western-blotting 分析 | 第35-36页 |
| ·pET-apxIA 的表达蛋白产物的初步纯化 | 第36-37页 |
| ·稳定性试验 | 第36页 |
| ·溶解性判定试验 | 第36页 |
| ·从包涵体中纯化表达蛋白 | 第36-37页 |
| 5. 讨论 | 第37-39页 |
| ·关于利用Apx制备新型亚单位疫苗的研究 | 第37页 |
| ·pET-apxIA和pET-apxIA在大肠杆菌中的表达 | 第37-38页 |
| ·表达蛋白的初步纯化 | 第38-39页 |
| 6. 结论 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-47页 |
| 缩写词英汉对照表 | 第47-48页 |
| 作者简介 | 第48-49页 |
| 导师简介 | 第49-50页 |
| 独创性声明 | 第50页 |
