| 符号说明 | 第1-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| ·糖尿病的类型及主要治疗方法 | 第11-12页 |
| ·糖尿病的类型 | 第11页 |
| ·主要治疗方法 | 第11-12页 |
| ·糖尿病治疗药物的研究进展 | 第12-14页 |
| ·天然药物的研究进展 | 第12-13页 |
| ·基因工程药物的研究 | 第13-14页 |
| ·有关的实验技术 | 第14-21页 |
| ·质粒的提取与纯化 | 第14-15页 |
| ·DNA的凝胶电泳 | 第15-16页 |
| ·基因工程表达系统 | 第16-19页 |
| ·外源基因转化 | 第19-20页 |
| ·常用的肽类分析技术 | 第20-21页 |
| ·开发重组人参多肽的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 重组质粒pPIC9-gsp的构建 | 第23-33页 |
| ·设计思路及研究方案 | 第23页 |
| ·基因序列的设计 | 第23页 |
| ·工程设计 | 第23页 |
| ·试验材料 | 第23-25页 |
| ·菌种与质粒 | 第23-24页 |
| ·试剂与工具酶 | 第24-25页 |
| ·仪器设备 | 第25页 |
| ·试验操作 | 第25-31页 |
| ·pBluescript-gsp质粒的提取 | 第25-26页 |
| ·gsp-1的双酶切 | 第26-27页 |
| ·DE81滤纸收集gsp-1 | 第27-28页 |
| ·Sephacryls-1000凝胶柱纯化质粒pPIC9 | 第28-29页 |
| ·质粒pPIC9的双酶切与收集 | 第29页 |
| ·连接反应 | 第29页 |
| ·转化pPIC9-gsp入JM109 | 第29-30页 |
| ·筛选菌种YYJ-1 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·质粒pPIC9溶液的浓度测定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pPIC9-gsp的验证 | 第32-33页 |
| 第三章 基因转化与工程菌株的筛选 | 第33-37页 |
| ·研究方案 | 第33页 |
| ·试验材料 | 第33-34页 |
| ·菌种 | 第33页 |
| ·试剂 | 第33-34页 |
| ·仪器设备 | 第34页 |
| ·试验操作 | 第34-35页 |
| ·电穿孔转化 | 第34-35页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-37页 |
| 第四章 目的蛋白的诱导表达与分析 | 第37-45页 |
| ·试验材料 | 第37页 |
| ·试剂 | 第37页 |
| ·仪器设备 | 第37页 |
| ·试验操作 | 第37-42页 |
| ·重组人参多肽的诱导表达 | 第37-39页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳 | 第39-42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-45页 |
| ·电泳结果 | 第42-43页 |
| ·蛋白酶抑制剂的研究 | 第43页 |
| ·重组克隆在不同培养基上的生长 | 第43-44页 |
| ·结构正确性的验证 | 第44-45页 |
| 第五章 表达优化与小样制备 | 第45-50页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·仪器设备 | 第45页 |
| ·实验操作 | 第45-47页 |
| ·表达优化 | 第45-46页 |
| ·表达产物的分离纯化 | 第46页 |
| ·蛋白的定量测定及标准曲线的绘制 | 第46-47页 |
| ·少量样品的制备 | 第47页 |
| ·结果与分析 | 第47-50页 |
| ·蛋白标准曲线 | 第47-48页 |
| ·表达优化结果 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录一 培养基 | 第56-59页 |
| 附录二 缓冲液 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第61页 |