| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 图表清单 | 第12-14页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 致谢 | 第15-16页 |
| 目录 | 第16-21页 |
| 前言 | 第21-22页 |
| 第1章 文献综述 | 第22-44页 |
| ·中介体复合物的研究进展 | 第22-27页 |
| ·中介体在酵母中的研究 | 第22-24页 |
| ·中介体在多细胞动物中的研究 | 第24-26页 |
| ·植物中介体的研究进展 | 第26-27页 |
| ·RNA干扰及在植物功能基因组学中的应用 | 第27-31页 |
| ·RNAi的原理 | 第27页 |
| ·植物RNAi的特点 | 第27-29页 |
| ·RNAi在植物品质改良中的应用 | 第29-31页 |
| ·蛋白互作研究的方法和技术 | 第31-44页 |
| ·双分子荧光互补(BiFC) | 第31-36页 |
| ·BIFC分析的原理 | 第31-34页 |
| ·BIFC的应用 | 第34-36页 |
| ·串联亲和纯化 | 第36-42页 |
| ·TAP的方法原理 | 第36-39页 |
| ·TAP在植物蛋白质组学中的应用 | 第39-42页 |
| ·两种方法的比较 | 第42-44页 |
| 第2章 烟草NTMED8的克隆和功能研究 | 第44-72页 |
| ·材料与方法 | 第45-50页 |
| ·实验材料与生长条件 | 第45页 |
| ·所用载体与试剂 | 第45页 |
| ·RNA提取与反转录 | 第45-46页 |
| ·NtMed8基因克隆 | 第46页 |
| ·RNAi载体构建 | 第46页 |
| ·烟草转化及方法优化 | 第46-48页 |
| ·无菌苗获得 | 第46-47页 |
| ·转化所用培养基 | 第47页 |
| ·转化程序 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR分析 | 第48页 |
| ·显微观察 | 第48-50页 |
| ·序列分析 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-66页 |
| ·NtMed8基因的克隆 | 第50-51页 |
| ·NtMed8蛋白序列分析 | 第51-54页 |
| ·NtMed8的表达模式 | 第54页 |
| ·NtMed8-RNAi转基因烟草获得 | 第54-57页 |
| ·NtMed8-RNAi对植株形态的影响 | 第57-58页 |
| ·NtMed8-RNAi对叶片细胞大小和解剖结构的影响 | 第58-61页 |
| ·NtMed8-RNAi对叶绿体超微结构的影响 | 第61-62页 |
| ·NtMed8-RNAi对于花形态和育性的影响 | 第62-63页 |
| ·NtMed8-RNAi对于烟草花期的影响 | 第63-64页 |
| ·NtMed8-RNAi植株中几个基因的表达水平检测 | 第64-66页 |
| ·RNAi植株外植体对激素的响应 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-72页 |
| ·NtMed8与植物中其它同源蛋白显示较高的序列同源性 | 第66-68页 |
| ·Med8至少在双子叶植物中功能是保守的 | 第68-69页 |
| ·NtMed8对于维持不同水平的形态大小是必需的 | 第69页 |
| ·NtMed8在发育的分子调控 | 第69-72页 |
| 第3章 烟草和水稻几个中介体亚基的克隆、亚细胞定位和农达谱分析 | 第72-92页 |
| ·材料与方法 | 第73-77页 |
| ·材料与生长条件 | 第73页 |
| ·所用载体、菌株与试剂 | 第73页 |
| ·亚细胞定位通用载体构建 | 第73-74页 |
| ·RNA提取及RT-PCR | 第74页 |
| ·中介体亚基克隆和融合表达载体构建 | 第74-75页 |
| ·农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达融合蛋白 | 第75-77页 |
| ·荧光观察 | 第77页 |
| ·表达谱及聚类分析 | 第77页 |
| ·结果与分析 | 第77-88页 |
| ·烟草和水稻中介体基因的的克隆 | 第77-78页 |
| ·亚细胞定位方法的建立 | 第78-79页 |
| ·烟草中介体亚基的亚细胞定位 | 第79-83页 |
| ·NTMED8的亚细胞定位 | 第79-82页 |
| ·NTMED6、NTMED 18和NTMED21的亚细胞定位 | 第82-83页 |
| ·水稻中介体亚基的亚细胞定位 | 第83-84页 |
| ·水稻中介体亚基的表达谱分析 | 第84-88页 |
| ·水稻中介体亚基及其水稻基因组中的分布 | 第84-86页 |
| ·水稻中介体亚基的表达谱 | 第86-88页 |
| ·讨论 | 第88-92页 |
| ·Linker对于融合蛋白结构和功能影响 | 第88-89页 |
| ·中介体亚基的亚细胞定位 | 第89-90页 |
| ·水稻中介体亚基的表达谱分析 | 第90-92页 |
| 第4章 利用BIFC研究烟草中介体亚基之间的互作 | 第92-104页 |
| ·材料与方法 | 第93-96页 |
| ·植物材料与生长条件 | 第93页 |
| ·所用载体、菌株与试剂 | 第93页 |
| ·通用BiFC载体的构建 | 第93-94页 |
| ·构建携带YFP片段的融合表达载体 | 第94-95页 |
| ·农杆菌介导的烟草叶片瞬时表达融合蛋白 | 第95-96页 |
| ·荧光观察 | 第96页 |
| ·结果 | 第96-101页 |
| ·含有荧光蛋白片段编码序列的BiFC载体构建 | 第96-97页 |
| ·NtMed8与NtMed18之间的互作关系 | 第97-100页 |
| ·NtMed8与Med6、Med21之间的互作关系 | 第100页 |
| ·NtMed6和NtMed21、NtMed18之间的互作关系 | 第100-101页 |
| ·结语与讨论 | 第101-104页 |
| 第5章 水稻OSMED8的初步研究 | 第104-122页 |
| ·材料与方法 | 第105-110页 |
| ·材料与生长条件 | 第105页 |
| ·所用载体、菌株与试剂 | 第105页 |
| ·RNA提取及反转录 | 第105页 |
| ·OsMed8的克隆与测序 | 第105-106页 |
| ·载体构建 | 第106-107页 |
| ·启动子活性分析载体构建 | 第106页 |
| ·过量表达载体构建 | 第106页 |
| ·干扰载体构建 | 第106-107页 |
| ·TAP载体构建 | 第107页 |
| ·水稻转化 | 第107-109页 |
| ·获得水稻愈伤 | 第107页 |
| ·侵染和共培养 | 第107-108页 |
| ·抗性愈伤的继代筛选与再生植株 | 第108-109页 |
| ·转基因植株检测 | 第109页 |
| ·再生植株的潮霉素浸泡鉴定 | 第109页 |
| ·再生植株的PCR检测 | 第109页 |
| ·半定量RT-PCR | 第109页 |
| ·GUS染色 | 第109-110页 |
| ·结果与分析 | 第110-118页 |
| ·OsMed8的克隆 | 第110页 |
| ·转基因水稻的获得 | 第110页 |
| ·OsMed8组织表达特性分析 | 第110-111页 |
| ·OsMed8对水稻花期的调节 | 第111-114页 |
| ·OsMed8表达变化对水稻植株形态发育的影响 | 第114页 |
| ·OsMed8对水稻育性的影响 | 第114-117页 |
| ·TAP载体的构建 | 第117-118页 |
| ·讨论 | 第118-122页 |
| 本文创新点 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-142页 |
| 附录1:附表 | 第142-144页 |
| 附录2:附图 | 第144-146页 |
| 作者简介 | 第146页 |
