| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 常用缩略词表 | 第12-16页 |
| 第一部分 绪论 | 第16-30页 |
| 1. 可游动精子的生殖概况 | 第16-19页 |
| ·哺乳动物的精子发生 | 第16-17页 |
| ·哺乳动物的精子成熟 | 第17-18页 |
| ·哺乳动物的精子获能 | 第18页 |
| ·哺乳动物的受精 | 第18-19页 |
| 2. 不可游动精子的生殖概况 | 第19-25页 |
| ·甲壳纲精子 | 第19-21页 |
| ·罗氏沼虾的生殖 | 第21-25页 |
| ·罗氏沼虾简介 | 第21-22页 |
| ·罗氏沼虾雄性生殖系统 | 第22-23页 |
| ·罗氏沼虾的精子和精卵受精 | 第23-24页 |
| ·罗氏沼虾雄性生殖系统研究现状 | 第24-25页 |
| 小结 | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-30页 |
| 第二部分 研究内容 | 第30-88页 |
| 第一章 罗氏沼虾雄性生殖系统壶腹消减文库的构建 | 第30-47页 |
| 1. 引言 | 第31-33页 |
| 2. 材料 | 第33页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·实验试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| 3. 方法 | 第33-41页 |
| ·罗氏沼虾雄性生殖系统总RNA的抽提 | 第33-34页 |
| ·FNSH cDNA文库的建立 | 第34-38页 |
| ·FNSH cDNA文库的筛选 | 第38-39页 |
| ·克隆菌转膜筛选 | 第39-40页 |
| ·筛选克隆测序和序列搜索比对分析 | 第40-41页 |
| 4. 结果 | 第41-45页 |
| ·差异性消减杂交文库的构建和插入片断检测 | 第41页 |
| ·差异性克隆的筛选 | 第41-42页 |
| ·挑取克隆测序和结果比对分析 | 第42-45页 |
| 5. 讨论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-47页 |
| 第二章 罗氏沼虾TAP基因的表达特征研究 | 第47-62页 |
| 1. 引言 | 第47-48页 |
| 2. 材料和仪器 | 第48-49页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·实验试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48-49页 |
| 3. 方法 | 第49-55页 |
| ·罗氏沼虾各组织总RNA的抽提 | 第49页 |
| ·半定量RT-PCR(semi-quantitative PCR) | 第49-50页 |
| ·原位杂交(In Situ Hybridization,ISH) | 第50-55页 |
| ·冷冻切片的准备 | 第50页 |
| ·原位杂交探针的制备 | 第50-53页 |
| ·原位杂交流程 | 第53-55页 |
| 4. 结果 | 第55-58页 |
| ·TAP基因的组织表达特征 | 第55-56页 |
| ·TAP基因在不同生长发育时期的表达 | 第56-57页 |
| ·TAP mRNA原位杂交检测结果 | 第57-58页 |
| 5. 讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 第三章 罗氏沼虾TAP蛋白的组织分布研究 | 第62-73页 |
| 1. 引言 | 第62-63页 |
| 2. 材料和仪器 | 第63页 |
| ·实验材料 | 第63页 |
| ·实验试剂 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| 3. 方法 | 第63-67页 |
| ·罗氏沼虾取材 | 第63-64页 |
| ·Western blotting | 第64-65页 |
| ·总蛋白提取 | 第64页 |
| ·蛋白样品检测 | 第64-65页 |
| ·免疫组化 | 第65-66页 |
| ·冷冻切片的制备 | 第65页 |
| ·抗体检测 | 第65-66页 |
| ·TAP在精子上的定位 | 第66-67页 |
| ·TAP在精子上的免疫荧光定位 | 第66页 |
| ·TAP在精子上的胶体金定位 | 第66-67页 |
| 4. 结果 | 第67-69页 |
| ·TAP蛋白的组织表达特异性 | 第67页 |
| ·TAP基因在不同生长发育时期的表达 | 第67-68页 |
| ·免疫组化检测结果 | 第68页 |
| ·TAP在精子上的免疫荧光和透射电镜免疫组化检测结果 | 第68-69页 |
| 5. 讨论 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-73页 |
| 第四章 罗氏沼虾TAP蛋白的功能研究 | 第73-87页 |
| 1. 引言 | 第73-74页 |
| 2. 材料和仪器 | 第74-75页 |
| ·实验材料 | 第75页 |
| ·实验试剂 | 第75页 |
| ·主要仪器 | 第75页 |
| 3. 方法 | 第75-80页 |
| ·RNA干扰 | 第75-77页 |
| ·干扰效率检测 | 第77-78页 |
| ·罗氏沼虾精子提取物的准备 | 第78页 |
| ·罗氏沼虾卵膜提取物的准备 | 第78-79页 |
| ·明胶SDS-PAGE | 第79页 |
| ·精子提取物对卵膜蛋白的降解作用 | 第79页 |
| ·受精率和受精卵发育观测 | 第79-80页 |
| 4. 结果 | 第80-83页 |
| ·干扰效率检测 | 第80页 |
| ·干扰后精子提取物水解明胶 | 第80-81页 |
| ·干扰后精子提取物降解卵膜蛋白 | 第81-82页 |
| ·干扰后受精率和受精卵发育观测 | 第82-83页 |
| 5. 讨论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 第五章 结论与展望 | 第87-88页 |
| 1. 结论 | 第87页 |
| 2. 展望 | 第87-88页 |
| 第三部分 创新点 | 第88-89页 |
| 第四部分 附录 | 第89-98页 |
| 附录一 论文中使用的引物表 | 第89-90页 |
| 附录二 常用试剂配制一览表 | 第90-97页 |
| 附录三 攻读博士期间发表论文 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
