| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第7-13页 |
| 第一部分 MUC1 通过激活 MUC1-EGFR-ABCB1 信号轴介导肿瘤化疗获得性耐药 | 第13-71页 |
| 第一章 前言 | 第13-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-31页 |
| 1 实验材料 | 第16-17页 |
| 1.1 分子生物学试剂 | 第16页 |
| 1.2 细胞培养相关试剂 | 第16-17页 |
| 1.3 实验动物 | 第17页 |
| 2 实验方法 | 第17-30页 |
| 2.1 细胞培养 | 第17页 |
| 2.2 耐药株的构建 | 第17-18页 |
| 2.3 细胞转染与感染 | 第18-19页 |
| 2.3.1 稳转细胞系构建 | 第18页 |
| 2.3.2 所用质粒 | 第18-19页 |
| 2.3.4 病毒包装与浓缩 | 第19页 |
| 2.4 制备细胞生长曲线 | 第19-20页 |
| 2.5 药物半数致死浓度（IC50）实验 | 第20-21页 |
| 2.6 免疫荧光实验 | 第21页 |
| 2.7 蛋白质印迹实验 | 第21-22页 |
| 2.8 流式细胞凋亡检测 | 第22-23页 |
| 2.9 核浆分离 | 第23页 |
| 2.10 Realtime-PCR检测 | 第23-26页 |
| 2.11 免疫共沉淀 | 第26页 |
| 2.12 染色体共沉淀实验 | 第26-27页 |
| 2.13 ABCB1 荧光素酶报告基因载体构建及Luciferase活性检测 | 第27页 |
| 2.14 免疫组化和HE染色 | 第27-29页 |
| 2.15 裸鼠荷瘤给药实验 | 第29页 |
| 2.16 裸鼠荷瘤联合给药实验 | 第29-30页 |
| 3 统计学分析 | 第30-31页 |
| 第三章 结果 | 第31-67页 |
| 1 数据库分析表明MUC1 表达与紫杉醇耐药性呈正相关 | 第31-33页 |
| 1.1 卵巢癌和胃癌内MUC1 表达与紫杉醇耐药性相关 | 第31-32页 |
| 1.2 MUC1 在宫颈癌和肺癌病人标本内高表达 | 第32-33页 |
| 2 MUC1 的表达与肿瘤细胞耐药性呈正相关 | 第33-37页 |
| 2.1 沉默MUC1 提高肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性 | 第33-35页 |
| 2.2 过表达MUC1 增加肿瘤细胞对紫杉醇的耐药性 | 第35-36页 |
| 2.3 MUC1 抑制剂能够有效提高肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性 | 第36-37页 |
| 3 紫杉醇诱导MUC1 基因转录并增加MUC1 蛋白稳定性 | 第37-42页 |
| 3.1 在紫杉醇耐药株中MUC1的mRNA和蛋白水平上调 | 第37-38页 |
| 3.2 紫杉醇诱导MUC1 基因表达 | 第38-40页 |
| 3.3 紫杉醇增加MUC1 蛋白的稳定性 | 第40-42页 |
| 4 MUC1调控紫杉醇诱导的ABCB1 的表达 | 第42-48页 |
| 4.1 沉默MUC1 降低ABCB1的mRNA水平 | 第42-43页 |
| 4.2 MUC1 在耐药株中调控ABCB1 表达 | 第43-45页 |
| 4.3 过表达MUC1 增加紫杉醇诱导的ABCB1 的表达 | 第45页 |
| 4.4 未见MUC1 影响ABCB1 蛋白降解途径 | 第45-46页 |
| 4.5 MUC1 增加了肿瘤细胞对其它ABCB1 底物药物的耐药性 | 第46-48页 |
| 5 ABCB1与MUC1 相互作用并稳定MUC | 第48-49页 |
| 5.1 ABCB1 的表达增加MUC1 的蛋白水平 | 第48页 |
| 5.2 ABCB1与MUC1 相互作用 | 第48-49页 |
| 6 抑制ABCB1 增加肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性 | 第49-53页 |
| 6.1 沉默ABCB1 降低肿瘤耐药株细胞的耐药性 | 第49-50页 |
| 6.2 过表达ABCB1 增加肿瘤细胞的耐药性 | 第50-51页 |
| 6.3 抑制ABCB1 降低MUC1 介导的紫杉醇耐药性 | 第51-52页 |
| 6.4 抑制ABCB1 增加耐药株细胞对药物的敏感性 | 第52-53页 |
| 7 MUC1与EGFR共同调控ABCB1 的表达 | 第53-59页 |
| 7.1 紫杉醇刺激下MUC1和EGFR在细胞核定位增加。 | 第53-55页 |
| 7.2 Erlotinib降低紫杉醇诱导的ABCB1 的上调 | 第55-56页 |
| 7.3 Erlotinib降低MUC1 导致的紫杉醇耐药性 | 第56-58页 |
| 7.4 MUC1 介导紫杉醇耐药性依赖于与EGFR的相互作用 | 第58-59页 |
| 8 MUC1与EGFR共同调控ABCB1 基因转录 | 第59-62页 |
| 8.1 MUC1与EGFR作用于ABCB1 启动子 | 第59-60页 |
| 8.2 Erlotinib抑制MUC1/EGFR与 ABCB1启动子结合 | 第60-61页 |
| 8.3 MUC1/EGFR增强ABCB1 启动子转录活性 | 第61-62页 |
| 9 移植瘤模型研究MUC1-EGFR-ABCB1 轴在肿瘤治疗中的作用 | 第62-66页 |
| 9.1 沉默MUC1 有效降低肿瘤细胞治疗后复发 | 第62-63页 |
| 9.2 沉默MUC1 引起紫杉醇诱导的细胞凋亡增加 | 第63-64页 |
| 9.3 沉默MUC1 降低紫杉醇诱导的EGFR入核和ABCB1 表达 | 第64-65页 |
| 9.4 抑制MUC1-EGFR-ABCB1 轴有效增强肿瘤对紫杉醇的敏感性 | 第65-66页 |
| 10 总结 | 第66-67页 |
| 第四章 讨论 | 第67-71页 |
| 第二部分 MUC1 调控细胞中期导致微管阻滞药物耐药性 | 第71-106页 |
| 第一章 前言 | 第71-75页 |
| 第二章 材料与方法 | 第75-79页 |
| 1 实验材料 | 第75页 |
| 1.1 试剂及抗体 | 第75页 |
| 1.2 细胞培养 | 第75页 |
| 1.3 动物实验 | 第75页 |
| 2 实验方法 | 第75-78页 |
| 2.1 细胞S期同步化 | 第75-76页 |
| 2.2 细胞M期同步化 | 第76页 |
| 2.3 细胞周期检测 | 第76-77页 |
| 2.4 PP2A活力检测 | 第77页 |
| 2.5 GST-pull down | 第77-78页 |
| 2.6 考马斯亮蓝染色 | 第78页 |
| 3 统计学分析 | 第78-79页 |
| 第三章 结果 | 第79-102页 |
| 1 MUC1在细胞中期表达量增加 | 第79-80页 |
| 2 沉默MUC1影响细胞出中期和对微管阻滞药物的耐药性 | 第80-83页 |
| 2.1 MUC1 缩短细胞中期时间 | 第80-81页 |
| 2.3 MUC1 使细胞逃逸紫杉醇导致的周期阻滞 | 第81-82页 |
| 2.4 MUC1 影响肿瘤细胞对微管阻滞药物的耐药性 | 第82-83页 |
| 2.5 MUC1 不影响p53 依赖的凋亡信号通路 | 第83页 |
| 3 MUC1与Bub R1 结合并促进其去磷酸化 | 第83-88页 |
| 3.1 MUC1 影响紫杉醇作用下CyclinB1 的降解 | 第83-84页 |
| 3.2 MUC1 影响BubR1 的去磷酸化速度 | 第84-85页 |
| 3.3 MUC1与BubR1 存在共定位 | 第85-87页 |
| 3.4 MUC1与BubR1 存在相互作用 | 第87-88页 |
| 4 MUC1与PP2A存在相互作用 | 第88-96页 |
| 4.1 质谱分析MUC1 结合蛋白 | 第88-89页 |
| 4.2 在HeLa229 细胞内MUC1与PP2A-Aα,PP2A-Cβ存在相互作用 | 第89页 |
| 4.3 HEK293T细胞中MUC1-C与 PP2A亚基相互作用 | 第89-91页 |
| 4.4 MUC1-CD与 PP2A亚基相互作用 | 第91-94页 |
| 4.5 MUC1-CD通过1-45 氨基酸序列与PP2A亚基结合 | 第94-95页 |
| 4.6 MUC1 通过CQC基序直接与PP2A-Aα和 PP2A-Cα结合 | 第95-96页 |
| 5 MUC1 影响细胞中期PP2A的酶的活力 | 第96-97页 |
| 6 MUC1 影响了细胞中期PP2A对 BubR1 的去磷酸化 | 第97-100页 |
| 6.1 MUC1与BubR1及PP2A-C亚基形成复合物 | 第97-98页 |
| 6.2 细胞中期BubR1 的磷酸化由PLK1 介导 | 第98-99页 |
| 6.3 PP2A介导BubR1 的去磷酸化 | 第99-100页 |
| 7 PP2A的抑制剂能够有效的降低MUC1 导致地紫杉醇耐药性 | 第100-101页 |
| 8 MUC1 影响Tubulin稳定性 | 第101-102页 |
| 第四章 讨论 | 第102-106页 |
| 第三部分 MUC1 导致肿瘤干细胞富集及机制初步研究 | 第106-118页 |
| 第一章 前言 | 第106-108页 |
| 第二章 材料方法 | 第108-110页 |
| 1.实验材料 | 第108页 |
| 1.1 实验动物 | 第108页 |
| 1.2 实验试剂 | 第108页 |
| 2 实验方法 | 第108-110页 |
| 2.1 原代细胞培养 | 第108-109页 |
| 2.2 梯度稀释接种肿瘤实验 | 第109页 |
| 2.3 成球实验 | 第109-110页 |
| 第三章 结果 | 第110-116页 |
| 1 MUC1导致肿瘤干细胞的富集 | 第110-112页 |
| 1.1 成球实验显示MUC1 的表达导致肿瘤干细胞富集 | 第110-111页 |
| 1.2 细胞成瘤频率实验证明MUC1 影响肿瘤干细胞比例 | 第111-112页 |
| 1.3 药物筛选富集肿瘤干细胞和MUC | 第112页 |
| 2 MUC1影响干细胞的耐药性 | 第112-113页 |
| 3 MUC1调控IL6和IL8 mRNA的表达 | 第113-116页 |
| 3.1 沉默MUC1后IL6和IL8 mRNA水平下降 | 第113-114页 |
| 3.2 MUC1 促进紫杉醇诱导的IL6和IL8 的上调 | 第114-115页 |
| 3.3 MUC1 促进裸鼠移植瘤内细胞IL6和IL8 的表达 | 第115-116页 |
| 第四章 讨论 | 第116-118页 |
| 结论 | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-128页 |
| 致谢 | 第128-132页 |
