| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-29页 |
| 1.1 趋化因子 | 第12-20页 |
| 1.1.1 趋化因子的结构和分类 | 第12-16页 |
| 1.1.2 趋化因子与疾病 | 第16-17页 |
| 1.1.3 趋化因子与受体的相互作用 | 第17-20页 |
| 1.2 趋化因子RANTES和MCP-2 的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3 分子伴侣Gro EL/Gro ES辅助蛋白折叠 | 第22-23页 |
| 1.4 信号通路偏好性的研究 | 第23-26页 |
| 1.5 本课题的主要研究内容 | 第26-29页 |
| 第二章 CCL8的制备与表征 | 第29-57页 |
| 2.1 实验材料与主要实验仪器 | 第29-34页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1.1 模板 | 第29页 |
| 2.1.1.2 引物 | 第29-30页 |
| 2.1.1.3 质粒和菌种 | 第30页 |
| 2.1.1.4 主要实验材料 | 第30-31页 |
| 2.1.2 主要实验试剂及其配置 | 第31-33页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-43页 |
| 2.2.1 重组表达载体构建 | 第34-37页 |
| 2.2.1.1 重组表达载体构建策略 | 第34-35页 |
| 2.2.1.2 PCR扩增目的基因及质粒提取 | 第35-36页 |
| 2.2.1.3 目的基因与载体双酶切、连接与转化 | 第36页 |
| 2.2.1.4 阳性克隆扩大培养及测序鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.2 蛋白表达纯化策略 | 第37-38页 |
| 2.2.3 融合蛋白表达条件的优化 | 第38-39页 |
| 2.2.4 融合蛋白的纯化和表征 | 第39-40页 |
| 2.2.5 目的蛋白的纯化和表征 | 第40-42页 |
| 2.2.6 目的蛋白和受体体外结合活性的表征 | 第42-43页 |
| 2.3 实验结果 | 第43-54页 |
| 2.3.1 重组表达载体构建 | 第43-45页 |
| 2.3.2 融合蛋白表达条件的优化 | 第45-47页 |
| 2.3.3 融合蛋白的纯化和表征 | 第47-50页 |
| 2.3.4 目的蛋白的纯化和表征 | 第50-53页 |
| 2.3.5 目的蛋白和受体体外结合活性的表征 | 第53-54页 |
| 2.4 分析讨论 | 第54-55页 |
| 2.4.1 重组表达载体构建 | 第54-55页 |
| 2.4.2 融合蛋白表达条件的优化 | 第55页 |
| 2.5 本章小结 | 第55-57页 |
| 第三章 人趋化因子CCL5的制备与表征 | 第57-73页 |
| 3.1 | 第57-58页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 3.1.1.1 模板 | 第57页 |
| 3.1.1.2 引物 | 第57-58页 |
| 3.1.1.3 质粒和菌种 | 第58页 |
| 3.1.1.4 主要实验材料 | 第58页 |
| 3.1.2 主要实验试剂及其配置 | 第58页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第58页 |
| 3.2 实验方法 | 第58-62页 |
| 3.2.1 重组表达载体构建 | 第58-59页 |
| 3.2.1.1 重组表达载体构建策略 | 第58-59页 |
| 3.2.1.2 重组表达载体构建方法 | 第59页 |
| 3.2.2 融合蛋白表达纯化策略 | 第59页 |
| 3.2.3 融合蛋白表达条件的优化 | 第59-61页 |
| 3.2.4 融合蛋白的纯化和表征 | 第61-62页 |
| 3.2.5 融合蛋白的大量酶切 | 第62页 |
| 3.3 实验结果 | 第62-71页 |
| 3.3.1 重组表达载体构建 | 第62-65页 |
| 3.3.2 融合蛋白表达条件的优化 | 第65-67页 |
| 3.3.3 融合蛋白的纯化与表征 | 第67-70页 |
| 3.3.3.1 融合蛋白的分离纯化 | 第67-69页 |
| 3.3.3.2 融合蛋白的Western Blot验证 | 第69页 |
| 3.3.3.3 融合蛋白的二级结构检测 | 第69-70页 |
| 3.3.4 融合蛋白的大量酶切 | 第70-71页 |
| 3.4 分析讨论 | 第71页 |
| 3.5 本章小结 | 第71-73页 |
| 第四章 分子伴侣辅助减少大肠杆菌表达包涵体的方法研究 | 第73-91页 |
| 4.1 实验材料与主要实验仪器 | 第73页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第73页 |
| 4.1.2 主要实验试剂及其配置 | 第73页 |
| 4.1.3 主要实验仪器 | 第73页 |
| 4.2 实验方法 | 第73-78页 |
| 4.2.1 重组表达载体构建 | 第73-74页 |
| 4.2.1.1 重组表达载体构建策略 | 第73-74页 |
| 4.2.1.2 重组表达载体构建方法 | 第74页 |
| 4.2.2 融合蛋白表达纯化策略 | 第74-75页 |
| 4.2.3 融合蛋白表达条件的优化 | 第75-77页 |
| 4.2.4 融合蛋白的分离纯化 | 第77-78页 |
| 4.3 实验结果 | 第78-89页 |
| 4.3.1 重组表达载体构建 | 第78-79页 |
| 4.3.2 融合蛋白表达条件的优化 | 第79-86页 |
| 4.3.3 融合蛋白的分离纯化 | 第86-89页 |
| 4.4 分析讨论 | 第89-90页 |
| 4.5 本章小结 | 第90-91页 |
| 第五章 不同趋化因子与同一受体CCR3的相互作用研究 | 第91-110页 |
| 5.1 实验材料与主要实验仪器 | 第91-92页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第91页 |
| 5.1.2 主要实验试剂及其配置 | 第91-92页 |
| 5.1.3 主要实验仪器 | 第92页 |
| 5.2 实验方法 | 第92-97页 |
| 5.2.1 趋化因子CCL8的内化和趋化实验 | 第93-95页 |
| 5.2.1.1 趋化因子CCL8的内化实验 | 第93页 |
| 5.2.1.2 趋化因子CCL8的趋化实验 | 第93-95页 |
| 5.2.2 CCR3-EGFP表达量随时间的变化 | 第95页 |
| 5.2.3 不同趋化因子刺激下的内化实验 | 第95-96页 |
| 5.2.4 不同趋化因子刺激下的钙流实验 | 第96-97页 |
| 5.2.5 不同趋化因子刺激下的趋化实验 | 第97页 |
| 5.3 实验结果 | 第97-108页 |
| 5.3.1 趋化因子CCL8的内化和趋化实验 | 第97-100页 |
| 5.3.1.1 趋化因子CCL8的内化实验 | 第97-98页 |
| 5.3.1.2 趋化因子CCL8的趋化实验 | 第98-100页 |
| 5.3.2 CCR3-EGFP表达量随时间的变化 | 第100-101页 |
| 5.3.3 不同趋化因子刺激下的内化实验 | 第101-102页 |
| 5.3.4 不同趋化因子刺激下的钙流实验 | 第102-106页 |
| 5.3.5 不同趋化因子刺激下的趋化实验 | 第106-108页 |
| 5.4 分析讨论 | 第108页 |
| 5.5 本章小结 | 第108-110页 |
| 结论 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-118页 |
| 附录 | 第118-120页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
