| 中文摘要 | 第4-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 缩略语/符号说明 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 研究现状、成果 | 第15-17页 |
| 研究目的、方法 | 第17-19页 |
| 一、帕唑帕尼对肺癌增殖和转移能力的体外研究 | 第19-51页 |
| 1.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 1.1.1 细胞株 | 第19页 |
| 1.1.2 主要试剂和材料 | 第19-20页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 1.1.4 试剂配制 | 第21-22页 |
| 1.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 1.2.1 细胞培养 | 第22-24页 |
| 1.2.2 MTT检测帕唑帕尼对A549,H460,L9981和YTMLC-90的抑制作用。 | 第24-25页 |
| 1.2.3 细胞生长曲线的测定 | 第25-26页 |
| 1.2.4 细胞周期的测定 | 第26页 |
| 1.2.5 细胞迁移能力检测 | 第26-27页 |
| 1.2.6 Transwell侵袭实验 | 第27-29页 |
| 1.3 结果 | 第29-37页 |
| 1.3.1 A549、H460、L9981和YTMLC-90生长曲线和倍增时间 | 第29页 |
| 1.3.2 药物抑制率 | 第29-30页 |
| 1.3.3 pazopanib对周期的影响 | 第30-32页 |
| 1.3.4 pazopanib对细胞迁移能力的影响 | 第32-36页 |
| 1.3.5 pazopanib对细胞侵袭能力的影响 | 第36-37页 |
| 1.4 讨论 | 第37-50页 |
| 1.4.1 帕唑帕尼的理化性质 | 第37页 |
| 1.4.2 帕唑帕尼对各细胞株存活率的抑制实验 | 第37-40页 |
| 1.4.3 帕唑帕尼对细胞迁移能力的影响 | 第40-41页 |
| 1.4.4 帕唑帕尼对侵袭能力的影响 | 第41-48页 |
| 1.4.5 帕唑帕尼对非小细胞肺癌周期的影响 | 第48-50页 |
| 1.5 小结 | 第50-51页 |
| 二、帕唑帕尼作用于多种非小细胞肺癌的表达谱和miRNA谱改变的检测和验证 | 第51-87页 |
| 2.1 实验材料 | 第51-53页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第51页 |
| 2.1.2 主要试剂盒材料 | 第51-52页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第52-53页 |
| 2.2 实验方法 | 第53-64页 |
| 2.2.1 细胞收集和总RNA制备 | 第53-54页 |
| 2.2.2 RNA定量和质检 | 第54页 |
| 2.2.3 芯片杂交 | 第54-56页 |
| 2.2.4 芯片洗涤 | 第56-58页 |
| 2.2.5 芯片扫描及数据采集 | 第58-59页 |
| 2.2.6 芯片数据处理和分析 | 第59-61页 |
| 2.2.7 实时定量引物设计 | 第61-62页 |
| 2.2.8 RealtimePCR | 第62-64页 |
| 2.3 实验结果 | 第64-81页 |
| 2.3.1 用于miRNA芯片的RNA质检 | 第64-65页 |
| 2.3.2 miRNA芯片结果 | 第65-67页 |
| 2.3.3 差异表达miRNA-mRNA关系及网络图 | 第67-77页 |
| 2.3.4 差异表达基因的realtimePCR验证 | 第77-79页 |
| 2.3.5 差异表达miRNA的realtimePCR验证 | 第79-81页 |
| 2.4 讨论 | 第81-86页 |
| 2.5 结论 | 第86-87页 |
| 三、糖代谢相关基因PCK2的验证和功能的初步研究 | 第87-119页 |
| 3.1 实验材料 | 第87-91页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第87页 |
| 3.1.2 主要试剂和材料 | 第87-88页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第88-89页 |
| 3.1.4 试剂配置 | 第89-91页 |
| 3.2 实验方法 | 第91-109页 |
| 3.2.1 PCK2过表达载体的构建 | 第91-102页 |
| 3.2.2 RNAoligo序列和订购 | 第102-103页 |
| 3.2.3 质粒及oligo转染 | 第103-104页 |
| 3.2.4 RealtimePCR检测PCK2siRNAs干扰效率 | 第104-105页 |
| 3.2.5 WesternBlot检测PCK2过表达载体及PCK2siRNAs在蛋白水平对PCK2表达的影响 | 第105-107页 |
| 3.2.6 转染PCK2siRNAs及过表达质粒对细胞增殖的影响 | 第107页 |
| 3.2.7 PCK2基因对细胞周期水平的影响 | 第107页 |
| 3.2.8 PCK2基因对低糖高乳酸环境下细胞葡萄糖消耗及乳酸生成水平的影响 | 第107-109页 |
| 3.3 实验结果 | 第109-116页 |
| 3.3.1 realtimePCR验证PCK2siRNA干扰效果,探究miR-1233-5p、miR-1307-5p与其的关系 | 第109-111页 |
| 3.3.2 WesternBlot检测帕唑帕尼对PCK2的诱导作用,及验证PCK2-pEGFP过表达效果 | 第111-112页 |
| 3.3.3 转染PCK2siRNAs及过表达质粒对周期的影响。 | 第112-113页 |
| 3.3.4 转染PCK2siRNAs或帕唑帕尼干预对A549在条件培养环境下葡萄糖的消耗和乳酸生成的影响 | 第113-114页 |
| 3.3.5 转染PCK2siRNAs及过表达质粒对细胞增殖的影响 | 第114-115页 |
| 3.3.6 转染PCK2过表达质粒对帕唑帕尼药物抑制率的影响 | 第115-116页 |
| 3.4 讨论 | 第116-118页 |
| 3.4.1 改变PCK2表达水平对培养环境中乳酸和葡萄糖的影响 | 第116-117页 |
| 3.4.2 改变PCK2表达水平对细胞增殖能力的影响 | 第117页 |
| 3.4.3 改变PCK2表达水平对帕唑帕尼对A549抑制能力的影响 | 第117-118页 |
| 3.5 小结 | 第118-119页 |
| 四、PTEN对多种抗肿瘤药物的单药和联合作用的影响 | 第119-134页 |
| 4.1 实验材料 | 第119-120页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第119页 |
| 4.1.2 主要试剂和材料 | 第119页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第119页 |
| 4.1.4 主要试剂配制 | 第119-120页 |
| 4.2 实验方法 | 第120-122页 |
| 4.2.1 接种细胞 | 第120页 |
| 4.2.2 稀释药物 | 第120-121页 |
| 4.2.3 加5mg/mlMTT溶液并酶标仪上机检测 | 第121页 |
| 4.2.4 计算细胞抑制率和联合干预的相关参数 | 第121-122页 |
| 4.3 结果 | 第122-129页 |
| 4.3.1 单药作用48小时对成组细胞株：MEFWT、MEFPTEN-/-,HCT116WT、HCTPTENKO35细胞的抑制作用 | 第122-127页 |
| 4.3.2 双药物联合对作用48小时对成组细胞株：MEFWT、MEFPTEN-/-,HCT116WT、HCT116PTENKO35细胞的抑制作用 | 第127-129页 |
| 4.4 讨论 | 第129-133页 |
| 4.5 小结 | 第133-134页 |
| 全文结论 | 第134-136页 |
| 论文创新点 | 第136-137页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第137-138页 |
| 附录 | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-148页 |
| 综述 | 第148-162页 |
| Reference | 第158-162页 |
| 致谢 | 第162-163页 |
