| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 1 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 猪圆环病毒的疫苗研发背景 | 第13-18页 |
| 1.1.1 猪圆环病毒简介 | 第13-14页 |
| 1.1.2 猪圆环病毒的致病机理 | 第14-15页 |
| 1.1.3 猪圆环病毒的防控现状 | 第15-17页 |
| 1.1.4 Cap蛋白的疫苗应用潜力 | 第17-18页 |
| 1.2 DEC‐205 研究背景 | 第18-22页 |
| 1.2.1 DEC‐205介导抗原提呈能力 | 第19-20页 |
| 1.2.2 DEC‐205介导抗原交叉提呈 | 第20-22页 |
| 1.3 DEC‐205 应用前景 | 第22-23页 |
| 1.3.1 靶向 DEC‐205 的疫苗设计策略 | 第22页 |
| 1.3.2 靶向 DEC‐205 的疫苗设计策略在多肽疫苗中的应用 | 第22-23页 |
| 1.3.3 靶向 DEC‐205 的疫苗设计策略在其他疫苗中的应用 | 第23页 |
| 1.4 本文研究内容 | 第23-27页 |
| 1.4.1 本文研究目的 | 第23-24页 |
| 1.4.2 本文主要内容 | 第24-25页 |
| 1.4.3 技术路线 | 第25-27页 |
| 2 SCFVDEC205‐CAP 融合基因的构建与原核表达 | 第27-67页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 材料与试剂配置 | 第27-30页 |
| 2.2.1 主要材料 | 第27页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第27-29页 |
| 2.2.3 溶液配制 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-51页 |
| 2.3.1 感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.3.2 载体构建示意图 | 第31-34页 |
| 2.3.3 重组表达载体构建 | 第34-44页 |
| 2.3.4 重组蛋白在大肠杆菌中诱导表达与分析鉴定 | 第44-48页 |
| 2.3.5 重组蛋白纯化 | 第48-50页 |
| 2.3.6 蛋白浓度测定‐Lowry 法 | 第50页 |
| 2.3.7 纯化蛋白 SDS‐PAGE 和 Western blot 鉴定 | 第50-51页 |
| 2.4 结果 | 第51-65页 |
| 2.4.1 重组表达载体构建 | 第51-54页 |
| 2.4.2 重组蛋白在大肠杆菌中诱导表达 | 第54-60页 |
| 2.4.3 重组蛋白 Western blot 分析结果 | 第60页 |
| 2.4.4 scFvDEC205蛋白纯化 | 第60-62页 |
| 2.4.5 Cap蛋白纯化 | 第62-63页 |
| 2.4.6 scFvDEC205‐Cap蛋白纯化 | 第63-64页 |
| 2.4.7 目的蛋白 Western blot | 第64-65页 |
| 2.4.8 蛋白浓度测定 | 第65页 |
| 2.5 讨论 | 第65-67页 |
| 3 猪圆环病毒疫苗 SCFVDEC205‐CAP 的免疫应答分析 | 第67-79页 |
| 3.1 引言 | 第67页 |
| 3.2 材料方法 | 第67-71页 |
| 3.2.1 主要材料 | 第67页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第67-68页 |
| 3.2.3 动物免疫 | 第68-69页 |
| 3.2.4 血清采集及脾淋巴细胞分离 | 第69页 |
| 3.2.5 体液免疫检测‐抗体滴度测定 | 第69页 |
| 3.2.6 细胞免疫检测‐脾淋巴细胞因子检测 | 第69-70页 |
| 3.2.7 scFvDEC205‐Cap激发小鼠中和抗体检测 | 第70-71页 |
| 3.3 实验结果 | 第71-76页 |
| 3.3.1 scFvDEC205‐Cap激发小鼠产生特异性血清效价 | 第71-72页 |
| 3.3.2 scFvDEC205‐Cap激发小鼠淋巴细胞分泌细胞因子水平 | 第72-74页 |
| 3.3.3 scFvDEC205‐Cap激发小鼠产生抗 PCV2 中和抗体效价 | 第74-76页 |
| 3.4 本章小结 | 第76-79页 |
| 4 猪圆环病毒疫苗 SCFVDEC205‐CAP 靶向增强树突状细胞抗原递呈功能的作用机制初探 | 第79-95页 |
| 4.1 引言 | 第79页 |
| 4.2 材料与设备 | 第79-81页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第79-80页 |
| 4.2.2 试剂配制 | 第80-81页 |
| 4.3 实验方法 | 第81-84页 |
| 4.3.1 小鼠骨髓细胞分离、培养和鉴定 | 第81-82页 |
| 4.3.2 小鼠骨髓树突状细胞吞噬能力鉴定 | 第82页 |
| 4.3.3 重组蛋白 scFvDEC205‐Cap 识别 BMDCs 表面受体 DEC‐205 | 第82页 |
| 4.3.4 重组蛋白 scFvDEC205‐Cap 诱导树突状细胞成熟 | 第82-83页 |
| 4.3.5 负载 scFvDEC205‐Cap 的 BMDCs 刺激 T 细胞产生固有免疫应答 | 第83页 |
| 4.3.6 负载 scFvDEC205‐Cap 的 BMDCs 刺激 T 细胞产生体液与细胞免疫应答 | 第83页 |
| 4.3.7 抑制 BMDCs 抗原交叉提呈途径对 T 淋巴细胞表达 IFN‐γ的影响 | 第83-84页 |
| 4.4 结果 | 第84-92页 |
| 4.4.1 小鼠骨髓树突状细胞分离、培养与鉴定 | 第84-87页 |
| 4.4.2 小鼠骨髓树突状细胞吞噬能力鉴定 | 第87页 |
| 4.4.3 重组蛋白 scFvDEC205‐Cap 识别 BMDCs 表面受体 DEC‐205 | 第87-88页 |
| 4.4.4 重组蛋白 scFvDEC205‐Cap 诱导树突状细胞成熟 | 第88-89页 |
| 4.4.5 负载 scFvDEC205‐Cap 的 BMDCs 刺激 T 细胞产生固有免疫应答 | 第89-90页 |
| 4.4.6 负载 scFvDEC205‐Cap 的 BMDCs 刺激 T 细胞产生体液与细胞免疫应答 | 第90-91页 |
| 4.4.7 抑制 BMDCs 提呈途径对刺激 T 淋巴细胞表达 IFN‐γ的影响 | 第91-92页 |
| 4.5 本章小结 | 第92-95页 |
| 5 结论与展望 | 第95-99页 |
| 5.1 全文主要结论 | 第95-97页 |
| 5.2 全文的创新点 | 第97页 |
| 5.3 论文不足之处及后续工作展望 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-111页 |
| 附录 | 第111-112页 |
| A.作者在攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第111页 |
| B.参加科研项目情况 | 第111-112页 |
| 附件 | 第112-120页 |
