| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1、前言 | 第9-19页 |
| 1.1 EV71病毒的特征 | 第9-14页 |
| 1.1.1 病毒颗粒结构 | 第9-11页 |
| 1.1.2 基因组结构 | 第11页 |
| 1.1.3 病毒的感染与复制 | 第11-13页 |
| 1.1.4 EV71 2C蛋白的功能 | 第13-14页 |
| 1.2 NF-κB信号通路 | 第14-17页 |
| 1.2.1 NF-κB家族蛋白 | 第14-15页 |
| 1.2.2 NF-κB的活化途径 | 第15-16页 |
| 1.2.3 病毒对NF-κB信号途径的抑制作用 | 第16-17页 |
| 总结 | 第17-19页 |
| 2、实验材料 | 第19-31页 |
| 2.1 细胞系 | 第19页 |
| 2.2 质粒 | 第19页 |
| 2.3 抗体 | 第19-20页 |
| 2.4 工具酶 | 第20页 |
| 2.5 菌株 | 第20页 |
| 2.6 试剂盒 | 第20页 |
| 2.7 生化试剂 | 第20-23页 |
| 2.8 耗材 | 第23页 |
| 2.9 实验仪器 | 第23-25页 |
| 2.10 溶液配制 | 第25-30页 |
| 2.11 数据处理和分析软件 | 第30-31页 |
| 3、实验方法 | 第31-49页 |
| 3.1 细胞培养 | 第31页 |
| 3.2 利用酵母双杂交方法以质粒PGBKT7-2C：为诱傅筛选人cDNA文库与其相互作用的蛋白 | 第31-35页 |
| 3.3 构建真核表达的克隆 | 第35-39页 |
| 3.4 质粒的大量提取 | 第39-40页 |
| 3.5 构建的克隆质粒转染HEK293T细胞 | 第40-41页 |
| 3.6 免疫印迹 | 第41-43页 |
| 3.7 免疫共沉淀方法验证蛋白间相互作用 | 第43-44页 |
| 3.8 外源基因在原核细胞表达的载体构建及表达 | 第44-45页 |
| 3.9 GST pulldown方法检测两个蛋白的相互作用 | 第45-47页 |
| 3.10 激光共聚焦观察相互作用蛋白在细胞内的共定位 | 第47页 |
| 3.11 双荧光素酶报告基因检测方法 | 第47-49页 |
| 4、结果 | 第49-74页 |
| 4.1 通过酵母双杂交方法筛选出与EV71 2C相互作用的候选蛋白 | 第49页 |
| 4.2 通过体内和体外实验对2C与p65相互作用的研究 | 第49-55页 |
| 4.2.1 通过免疫共沉淀验证了2C与p65相互作用 | 第49-51页 |
| 4.2.2 通过GST pull down验证了2C与p65相互作用 | 第51-54页 |
| 4.2.3 激光共聚焦观察2C和p65在细胞内的共定位 | 第54-55页 |
| 4.3 与EV71 2C相互作用的p65区域研究 | 第55-60页 |
| 4.3.1 p65 N端1-290氨基酸与EV71 2C相互作用 | 第55-58页 |
| 4.3.2 p65 N端194-290氨基酸与EV71 2C相互作用 | 第58-60页 |
| 4.4 2C通过与p65 IPT结构域结合而抑制p65和p50的二聚体形成 | 第60-62页 |
| 4.5 与p65 IPT结构域互作的2C区域的研究 | 第62-70页 |
| 4.5.1 与p65 IPT结构域互作的2C区域有两个，分别是N端105-125氛基酸和C端105-329氨基酸 | 第62-66页 |
| 4.5.2 与p65 IPT结构域互作的2C N端区域定位于105-125氨基酸以及122-125四个氨基酸PVCL是二者的结合位点 | 第66-68页 |
| 4.5.3 与p65 IPT结构域互作的2C C端区域定位于126-263氨基酸 | 第68-70页 |
| 4.6 2C分别与IKKβ和p65结合共同发挥调节NF-κB活化的功能 | 第70-74页 |
| 4.6.1 2C 105-125和2C 126-263皆抑制NF-κB活化 | 第71-72页 |
| 4.6.2 2C 1-104和2C 105-125皆与IKKβ相互作用 | 第72页 |
| 4.6.3 2C 1-104抑制NF-κB活化 | 第72-73页 |
| 4.6.4 2C 121氨基酸可作为区分2C与p65和IKKβ相互作用区域的分界点 | 第73-74页 |
| 5 、结果分析及讨论 | 第74-80页 |
| 一、以EV71 2C为诱饵通过酵母双杂交文库筛选得到与其相互作用的蛋白为p65 | 第74-77页 |
| (1) EV71 2C蛋白 | 第74-75页 |
| (2) 酵母双杂交 | 第75-76页 |
| (3) 2C与p65相互作用 | 第76-77页 |
| 二、2C调节NF-κB活化的复杂性 | 第77-79页 |
| (1) 2C与p65的作用调节NF-κB活化 | 第77-78页 |
| (2) 2C与IKKβ的作用调节NF-κB活化 | 第78-79页 |
| 三、下一步的研究方向 | 第79页 |
| (1) 2C蛋白结构的晶体 | 第79页 |
| (2) EV712C同源蛋白是否与p65和IKKβ结合,是否能够抑制NF-κB的活化 | 第79页 |
| 四、总结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-87页 |
| 综述 | 第87-98页 |
| 参考文献 | 第93-98页 |
| 英文缩略词对照表 | 第98-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
