| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 文献综述 | 第15-38页 |
| 第一章 猪圆环病毒及猪圆环病毒病研究进展 | 第15-26页 |
| ·猪圆环病毒 | 第15-20页 |
| ·猪圆环病毒名称的由来 | 第15页 |
| ·猪圆环病毒的分类地位 | 第15-16页 |
| ·PCV 全球流行情况及分布 | 第16-17页 |
| ·PCV 的形态学特征 | 第17-18页 |
| ·PCV 的理化特征 | 第18页 |
| ·PCV 基因 | 第18页 |
| ·PCV 的转录与复制 | 第18-19页 |
| ·PCV 蛋白 | 第19-20页 |
| ·PCV-2 的致病性及致病机理 | 第20-26页 |
| ·PCV-2 引起疾病的病理学 | 第22-23页 |
| ·PCV-2 所致疾病的诊断 | 第23-26页 |
| 第二章 杆状病毒表面展示系统研究进展 | 第26-38页 |
| ·杆状病毒 | 第26-29页 |
| ·分类 | 第26页 |
| ·在细胞中的复制过程 | 第26-28页 |
| ·生活史 | 第28页 |
| ·膜融合蛋白的种类和作用 | 第28-29页 |
| ·gp64 的基因治疗作用 | 第29页 |
| ·真核展示系统简介 | 第29-33页 |
| ·囊膜糖蛋白gp64 | 第30页 |
| ·展示机理 | 第30-31页 |
| ·杆状病毒展示系统的优点 | 第31页 |
| ·杆状病毒表面展示方法 | 第31-33页 |
| ·杆状病毒表面展示系统的应用 | 第33-36页 |
| ·抗原抗体制备 | 第33-34页 |
| ·抗原表位分析 | 第34页 |
| ·RNA 干扰 | 第34-35页 |
| ·基因治疗 | 第35页 |
| ·制备单克隆抗体 | 第35页 |
| ·在新型疫苗研制方面的应用 | 第35-36页 |
| ·杆状病毒展示系统的缺陷及发展前景 | 第36-38页 |
| 试验研究 | 第38-84页 |
| 第三章 猪圆环病毒2 型YL 株ORF2 基因的克隆、序列分析及原核表达 | 第38-55页 |
| ·材料 | 第38-40页 |
| ·病毒与细胞 | 第38页 |
| ·菌株、质粒和试剂 | 第38页 |
| ·实验所用的主要溶液及培养基的制备 | 第38-40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-47页 |
| ·引物的设计与合成 | 第40页 |
| ·PCV-2 YL 毒株细胞毒DNA 的提取 | 第40-41页 |
| ·PCV-2 ORF2 基因的PCR 扩增 | 第41页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第41-42页 |
| ·PCR 回收产物与T 载体连接 | 第42页 |
| ·pGEM-T-ORF2 连接产物的转化 | 第42-43页 |
| ·阳性菌的筛选、鉴定 | 第43-44页 |
| ·序列测定 | 第44页 |
| ·表达质粒的构建 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白pET-32a-ORF2 的诱导表达及检测 | 第45-46页 |
| ·表达的ORF2 蛋白Western blot 分析 | 第46-47页 |
| ·结果 | 第47-52页 |
| ·ORF2 基因的PCR 扩增 | 第47页 |
| ·pGEM-T-ORF2 重组质粒的酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·ORF2 基因序列测定及分析 | 第48-50页 |
| ·重组质粒pET-32a-ORF2 的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·ORF2 原核表达的SDS-PAGE 电泳 | 第51-52页 |
| ·Western blot 分析 | 第52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·PCV-2 ORF2 基因的扩增和克隆 | 第52-53页 |
| ·PCV-2 YL 株ORF2 基因序列分析 | 第53页 |
| ·表达载体的选择 | 第53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 第四章 杆状病毒表面展示系统表达猪圆环病毒囊膜蛋白及动物免疫试验 | 第55-84页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·菌株、质粒和细胞 | 第55页 |
| ·工具酶和试剂 | 第55页 |
| ·培养基、抗生素 | 第55-56页 |
| ·血清及抗体 | 第56页 |
| ·仪器与设备 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-74页 |
| ·昆虫细胞培养 | 第56-57页 |
| ·BAC-TO-BAC 杆状病毒展示系统 | 第57-60页 |
| ·转座载体pFastSC 的构建 | 第60-61页 |
| ·PCR 引物合成 | 第61页 |
| ·PCR 扩增 | 第61-62页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第62页 |
| ·酶切及连接 | 第62页 |
| ·大肠埃希菌感受态细胞的制备 | 第62-63页 |
| ·连接产物的转化 | 第63页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第63-64页 |
| ·重组pBac SC-ORF2 质粒DNA 的转座 | 第64-65页 |
| ·重组Bacmid DNA 的提取与制备 | 第65页 |
| ·重组Bacmid DNA 转染sf9 细胞 | 第65-66页 |
| ·重组杆状病毒的 PCR 鉴定 | 第66页 |
| ·重组杆状病毒增殖和浓缩 | 第66页 |
| ·终点稀释法（ End-point dilution method ）测定病毒滴度 | 第66-67页 |
| ·噬斑试验测定重组杆状病毒毒价 | 第67-68页 |
| ·蛋白质分析 | 第68-71页 |
| ·共聚焦显微镜分析重组蛋白在sf9 细胞膜上的表现 | 第71页 |
| ·免疫电镜分析重组蛋白在杆状病毒囊膜上的表现 | 第71-72页 |
| ·重组蛋白的动物免疫实验 | 第72-73页 |
| ·血清抗体的检测 | 第73页 |
| ·血清中和试验 | 第73页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第73-74页 |
| ·结果 | 第74-80页 |
| ·重组转座质粒pBacSC-ORF2 的构建和筛选 | 第74-75页 |
| ·穿梭质粒BacmidSC-ORF2 的构建、筛选和鉴定 | 第75页 |
| ·BacmidSC-ORF2 的转染 | 第75-76页 |
| ·重组杆状病毒的PCR 鉴定 | 第76-77页 |
| ·重组杆状病毒增殖和浓缩 | 第77页 |
| ·噬斑试验测定重组杆状病毒毒价 | 第77页 |
| ·ORF2 融合蛋白在昆虫细胞上的表达 | 第77-78页 |
| ·共聚焦显微镜分析重组杆状病毒在细胞膜上的表达 | 第78页 |
| ·重组杆状病毒囊膜的 SDS-PAGE 和Western blot 检测 | 第78-79页 |
| ·免疫电镜分析重组蛋白在杆状病毒囊膜上的表达 | 第79页 |
| ·ELISA 检测免疫小鼠的血清抗体 | 第79页 |
| ·中和试验 | 第79-80页 |
| ·淋巴细胞增殖试验 | 第80页 |
| ·讨论 | 第80-83页 |
| ·杆状病毒及其表面展示系统 | 第80-81页 |
| ·建构重组杆状病毒 | 第81-82页 |
| ·重组杆状病毒感染sf9 感染 | 第82页 |
| ·融合蛋白在昆虫细胞表面和杆状病毒囊膜上的展示 | 第82页 |
| ·重组杆状病毒作为基因工程亚单位疫苗的潜在性 | 第82-83页 |
| ·小结 | 第83-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 创新点 | 第85页 |
| 需要继续研究的内容 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-98页 |
| 致谢 | 第98-99页 |
| 作者简介 | 第99页 |
