| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 氰化物的性质和来源 | 第10页 |
| 1.2 降氰微生物的分类 | 第10-14页 |
| 1.2.1 可耐受碱性或高浓度氰的菌种 | 第11-12页 |
| 1.2.2 能利用氰为碳源或氮源的菌种 | 第12-14页 |
| 1.3 降氰酶的研究现状 | 第14-18页 |
| 1.3.1 降氰途径及降氰酶的分类 | 第14-16页 |
| 1.3.2 具有水解途径的菌种及相应的降氰酶 | 第16-18页 |
| 1.4 氰水合酶和氰水解酶的克隆研究现状 | 第18-19页 |
| 1.5 研究课题简介 | 第19-21页 |
| 1.5.1 研究目的和意义 | 第19-20页 |
| 1.5.2 本文主要工作 | 第20-21页 |
| 第二章 产碱杆菌DN25对氰的代谢特性 | 第21-32页 |
| 2.1 实验材料和设备 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 菌种和培养基 | 第21页 |
| 2.1.3 实验设备及型号 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 分析方法 | 第22-23页 |
| 2.2.2 种子液的制备 | 第23页 |
| 2.2.3 以氰化物为唯一碳源或氮源的考察 | 第23页 |
| 2.2.4 培养条件对代谢的影响 | 第23-24页 |
| 2.2.5 细菌生长的最低抑制氰浓度的考察 | 第24页 |
| 2.2.6 产碱杆菌DN25对氰降解产物的同化作用 | 第24页 |
| 2.3 结果及讨论 | 第24-31页 |
| 2.3.1 以氰化物为唯一碳源或氮源的考察 | 第24-26页 |
| 2.3.2 培养条件对代谢的影响 | 第26-28页 |
| 2.3.3 细菌生长的最低抑制氰浓度 | 第28-30页 |
| 2.3.4 产碱杆菌DN25对氰水解产物的同化作用 | 第30-31页 |
| 2.4 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 产碱杆菌DN25降氰酶基因的克隆和表达 | 第32-52页 |
| 3.1 实验材料与设备 | 第32-33页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第32页 |
| 3.1.2 菌株与质粒 | 第32页 |
| 3.1.3 培养基 | 第32页 |
| 3.1.4 实验设备与型号 | 第32-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-40页 |
| 3.2.1 细菌基因组总DNA提取 | 第33-34页 |
| 3.2.2 DNA产物纯化和回收 | 第34页 |
| 3.2.3 PCR扩增降氰酶基因 | 第34-35页 |
| 3.2.4 目的基因的克隆和测序 | 第35-36页 |
| 3.2.5 构建表达载体pET28a-cdE | 第36-37页 |
| 3.2.6 工程菌BL21(DE3)-pET28a-cdE的构建 | 第37页 |
| 3.2.7 降氰酶基因cdE在大肠杆菌E-coli中的表达 | 第37-39页 |
| 3.2.8 酶活测定方法的确定 | 第39页 |
| 3.2.9 重组菌的诱导表达条件优化 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第40-51页 |
| 3.3.1 产碱杆菌DN25基因组总DNA提取 | 第40页 |
| 3.3.2 PCR扩增降氰酶基因 | 第40-41页 |
| 3.3.3 目的基因的克隆与鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.4 重组质粒pET28a-cdE的构建 | 第42-44页 |
| 3.3.5 降氰酶基因cdE在E.coli中的表达 | 第44-45页 |
| 3.3.6 酶活测定方法的确定 | 第45-46页 |
| 3.3.7 重组大肠杆菌表达条件优化 | 第46-51页 |
| 3.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 产碱杆菌DN25氰降解机理的研究 | 第52-60页 |
| 4.1 实验材料与设备 | 第52-53页 |
| 4.1.1 试剂与仪器 | 第52页 |
| 4.1.2 实验设备及型号 | 第52-53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-54页 |
| 4.2.1 重组降氰酶的亲和层析纯化 | 第53-54页 |
| 4.2.2 纯酶催化氰水解反应进程 | 第54页 |
| 4.2.3 纯酶催化甲酰胺水解反应进程 | 第54页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第54-59页 |
| 4.3.1 降氰酶的亲和层析纯化 | 第54-56页 |
| 4.3.2 纯酶催化氰降解反应 | 第56-59页 |
| 4.4 小结 | 第59-60页 |
| 第五章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 5.1 结论 | 第60页 |
| 5.2 展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-70页 |
| 附录 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第75页 |
