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4-1BB信号通路调控巨噬细胞分泌细胞因子及其对矽肺纤维化影响的实验研究

摘要第4-8页
Abstract第8-13页
英文缩略语第14-22页
第一部分 :4-1BB信号通路调控巨噬细胞分泌细胞因子的实验研究第22-71页
    1 前言第22-24页
    2 材料与方法第24-37页
        2.1 主要试剂与仪器第24-27页
            2.1.1 主要试剂第24-26页
            2.1.2 主要仪器第26-27页
        2.2 主要试剂的配制第27-29页
            2.2.1 1mol/LHEPES第27页
            2.2.2 10 ×红细胞裂解液第27页
            2.2.3 4%台盼蓝第27页
            2.2.4 4%多聚甲醛第27-28页
            2.2.5 完全1640培养基第28页
            2.2.6 蛋白裂解液第28页
            2.2.7 1×电泳缓冲液(runningbuffer)第28页
            2.2.8 转膜液(trans-buffer)第28页
            2.2.9 1×TBS第28页
            2.2.10 1%TBST第28页
            2.2.11 封闭液第28页
            2.2.12 10 %SDS溶液第28页
            2.2.13 10 %APS溶液第28页
            2.2.14 10 %I型胶原酶第28-29页
            2.2.15 10 %DNaseI第29页
            2.2.16 肺组织裂解液第29页
            2.2.17 75 %DEPC酒精第29页
        2.3 研究对象与分组第29-31页
            2.3.1 实验动物饲养第29页
            2.3.2 动物分组及模型的建立第29页
            2.3.3 MH-S细胞培养第29-30页
            2.3.4 细胞计数第30页
            2.3.5 MH-S细胞冻存第30页
            2.3.6 MH-S细胞复苏第30页
            2.3.7 细胞分组及处理第30-31页
        2.4 慢病毒转染第31-32页
            2.4.1 感染细胞最佳MOI的测定第31-32页
            2.4.2 细胞病毒转染第32页
        2.5 肺组织单细胞悬液制备第32-33页
        2.6 流式细胞术第33页
        2.7 肺泡巨噬细胞提取及纯化第33页
        2.8 蛋白提取及定量第33页
        2.9 westernblot检测第33-34页
        2.10 Realtime—PCR检测第34-35页
            2.10.1 总RNA的提取第34页
            2.10.2 逆转录为cDNA第34页
            2.10.3 mRNA扩增与检测第34-35页
        2.11 酶联免疫吸附试验(ELISA)第35-36页
        2.12 统计学分析第36-37页
    3 结果第37-67页
        3.1 矽尘暴露小鼠肺泡巨噬细胞4-1BB表达增加第37-45页
            3.1.1 矽尘暴露小鼠肺内巨噬细胞变化情况第37-39页
            3.1.2 矽尘暴露小鼠肺泡巨噬细胞4-1BB表达增加第39页
            3.1.3 矽尘暴露小鼠肺泡巨噬细胞4-1BBL表达增加第39-40页
            3.1.4 矽尘暴露小鼠肺间质巨噬细胞4-1BB的表达第40-41页
            3.1.5 矽尘暴露小鼠肺间质巨噬细胞4-1BBL的表达第41-42页
            3.1.6 矽尘暴露小鼠肺内CD4+T细胞变化情况第42-44页
            3.1.7 矽尘暴露小鼠效应T细胞4-1BB的表达第44页
            3.1.8 矽尘暴露小鼠初始T细胞4-1BB的表达第44-45页
        3.2 矽尘可诱导小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S表达4-1BB第45-48页
        3.3 激活4-1BB信号通路可促进矽尘暴露巨噬细胞分泌促炎和促纤维化因子第48-55页
            3.3.1 4-1BB激活抗体可激活巨噬细胞中4-1BB下游ASK-1-p38/JNK信号通路第48-51页
            3.3.2 激活4-1BB信号通路可促进矽尘暴露巨噬细胞表达MMP9、MMP12和MCP-第51-53页
            3.3.3 激活4-1BB信号通路可促进矽尘暴露巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α第53-55页
        3.4 阻断4-1BB信号通路可抑制矽尘暴露巨噬细胞分泌促炎和促纤维化因子第55-67页
            3.4.1 NQDI1使用剂量的确定第55-56页
            3.4.2 慢病毒转染效果第56-58页
            3.4.3 4-1BB阻滞剂4-1BBIg和NQDI1可抑制矽尘暴露巨噬细胞中4-1BB信号通路的激活第58-62页
            3.4.4 阻断4-1BB信号通路可抑制矽尘暴露巨噬细胞表达MMP9、MMP12和MCP-第62-64页
            3.4.5 阻断4-1BB信号通路可抑制矽尘暴露巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α第64-67页
    4 讨论第67-71页
第二部分 :4-1BB信号通路对矽尘暴露小鼠肺组织中促纤维化因子分泌影响的实验研究第71-98页
    5 前言第71-73页
    6 材料与方法第73-80页
        6.1 主要试剂与仪器第73-75页
            6.1.1 主要试剂第73-74页
            6.1.2 主要仪器第74-75页
        6.2 主要试剂的配制第75-76页
            6.2.1 4%多聚甲醛第75页
            6.2.2 蛋白裂解液第75页
            6.2.3 1 ×电泳缓冲液(runningbuffer)第75页
            6.2.4 转膜液(trans-buffer)第75页
            6.2.5 1 ×TBS第75页
            6.2.6 1%TBST第75-76页
            6.2.7 封闭液第76页
            6.2.8 10%SDS溶液第76页
            6.2.9 10%APS溶液第76页
        6.3 研究对象与分组第76-77页
            6.3.1 实验动物饲养第76页
            6.3.2 动物分组及模型的建立第76-77页
        6.4 蛋白提取及定量第77页
        6.5 westernblot检测第77页
        6.6 ELISA检测第77-78页
        6.7 免疫组织化学染色第78-79页
            6.7.1 石蜡包埋于切片第78页
            6.7.2 染色第78-79页
        6.8 统计学分析第79-80页
    7 结果第80-93页
        7.1 上游阻断4-1BB信号通路可减少矽尘暴露小鼠肺组织中促炎和促纤维化因子的分泌第80-86页
            7.1.1 上游阻断4-1BB信号通路可有效阻断矽尘所致肺部4-1BB信号通路的激活第80-81页
            7.1.2 上游阻断4-1BB信号通路可减少矽尘暴露小鼠肺组织中MMP9和MMP12的表达第81-84页
            7.1.3 上游阻断4-1BB信号通路可减少矽尘暴露小鼠肺组织中促炎和促纤维化细胞因子的分泌第84-86页
        7.2 下游阻断4-1BB信号通路可减少矽尘暴露小鼠肺组织中促炎和促纤维化因子的分泌第86-93页
            7.2.1 下游阻断4-1BB信号通路可减少矽尘暴露小鼠肺组织中MMP9和MMP12的表达第86-91页
            7.2.2 下游阻断4-1BB信号通路可减轻矽尘所致肺组织纤维化第91-93页
    8 讨论第93-97页
    9 结论第97-98页
对本研究创新性的自我评价第98-99页
参考文献第99-106页
综述第106-123页
    参考文献第112-123页
攻读学位期间取得的研究成果第123-124页
致谢第124-125页
个人简历第125页

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