摘要 | 第4-8页 |
Abstract | 第8-13页 |
英文缩略语 | 第14-22页 |
第一部分 :4-1BB信号通路调控巨噬细胞分泌细胞因子的实验研究 | 第22-71页 |
1 前言 | 第22-24页 |
2 材料与方法 | 第24-37页 |
2.1 主要试剂与仪器 | 第24-27页 |
2.1.1 主要试剂 | 第24-26页 |
2.1.2 主要仪器 | 第26-27页 |
2.2 主要试剂的配制 | 第27-29页 |
2.2.1 1mol/LHEPES | 第27页 |
2.2.2 10 ×红细胞裂解液 | 第27页 |
2.2.3 4%台盼蓝 | 第27页 |
2.2.4 4%多聚甲醛 | 第27-28页 |
2.2.5 完全1640培养基 | 第28页 |
2.2.6 蛋白裂解液 | 第28页 |
2.2.7 1×电泳缓冲液(runningbuffer) | 第28页 |
2.2.8 转膜液(trans-buffer) | 第28页 |
2.2.9 1×TBS | 第28页 |
2.2.10 1%TBST | 第28页 |
2.2.11 封闭液 | 第28页 |
2.2.12 10 %SDS溶液 | 第28页 |
2.2.13 10 %APS溶液 | 第28页 |
2.2.14 10 %I型胶原酶 | 第28-29页 |
2.2.15 10 %DNaseI | 第29页 |
2.2.16 肺组织裂解液 | 第29页 |
2.2.17 75 %DEPC酒精 | 第29页 |
2.3 研究对象与分组 | 第29-31页 |
2.3.1 实验动物饲养 | 第29页 |
2.3.2 动物分组及模型的建立 | 第29页 |
2.3.3 MH-S细胞培养 | 第29-30页 |
2.3.4 细胞计数 | 第30页 |
2.3.5 MH-S细胞冻存 | 第30页 |
2.3.6 MH-S细胞复苏 | 第30页 |
2.3.7 细胞分组及处理 | 第30-31页 |
2.4 慢病毒转染 | 第31-32页 |
2.4.1 感染细胞最佳MOI的测定 | 第31-32页 |
2.4.2 细胞病毒转染 | 第32页 |
2.5 肺组织单细胞悬液制备 | 第32-33页 |
2.6 流式细胞术 | 第33页 |
2.7 肺泡巨噬细胞提取及纯化 | 第33页 |
2.8 蛋白提取及定量 | 第33页 |
2.9 westernblot检测 | 第33-34页 |
2.10 Realtime—PCR检测 | 第34-35页 |
2.10.1 总RNA的提取 | 第34页 |
2.10.2 逆转录为cDNA | 第34页 |
2.10.3 mRNA扩增与检测 | 第34-35页 |
2.11 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第35-36页 |
2.12 统计学分析 | 第36-37页 |
3 结果 | 第37-67页 |
3.1 矽尘暴露小鼠肺泡巨噬细胞4-1BB表达增加 | 第37-45页 |
3.1.1 矽尘暴露小鼠肺内巨噬细胞变化情况 | 第37-39页 |
3.1.2 矽尘暴露小鼠肺泡巨噬细胞4-1BB表达增加 | 第39页 |
3.1.3 矽尘暴露小鼠肺泡巨噬细胞4-1BBL表达增加 | 第39-40页 |
3.1.4 矽尘暴露小鼠肺间质巨噬细胞4-1BB的表达 | 第40-41页 |
3.1.5 矽尘暴露小鼠肺间质巨噬细胞4-1BBL的表达 | 第41-42页 |
3.1.6 矽尘暴露小鼠肺内CD4+T细胞变化情况 | 第42-44页 |
3.1.7 矽尘暴露小鼠效应T细胞4-1BB的表达 | 第44页 |
3.1.8 矽尘暴露小鼠初始T细胞4-1BB的表达 | 第44-45页 |
3.2 矽尘可诱导小鼠肺泡巨噬细胞系MH-S表达4-1BB | 第45-48页 |
3.3 激活4-1BB信号通路可促进矽尘暴露巨噬细胞分泌促炎和促纤维化因子 | 第48-55页 |
3.3.1 4-1BB激活抗体可激活巨噬细胞中4-1BB下游ASK-1-p38/JNK信号通路 | 第48-51页 |
3.3.2 激活4-1BB信号通路可促进矽尘暴露巨噬细胞表达MMP9、MMP12和MCP- | 第51-53页 |
3.3.3 激活4-1BB信号通路可促进矽尘暴露巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α | 第53-55页 |
3.4 阻断4-1BB信号通路可抑制矽尘暴露巨噬细胞分泌促炎和促纤维化因子 | 第55-67页 |
3.4.1 NQDI1使用剂量的确定 | 第55-56页 |
3.4.2 慢病毒转染效果 | 第56-58页 |
3.4.3 4-1BB阻滞剂4-1BBIg和NQDI1可抑制矽尘暴露巨噬细胞中4-1BB信号通路的激活 | 第58-62页 |
3.4.4 阻断4-1BB信号通路可抑制矽尘暴露巨噬细胞表达MMP9、MMP12和MCP- | 第62-64页 |
3.4.5 阻断4-1BB信号通路可抑制矽尘暴露巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α | 第64-67页 |
4 讨论 | 第67-71页 |
第二部分 :4-1BB信号通路对矽尘暴露小鼠肺组织中促纤维化因子分泌影响的实验研究 | 第71-98页 |
5 前言 | 第71-73页 |
6 材料与方法 | 第73-80页 |
6.1 主要试剂与仪器 | 第73-75页 |
6.1.1 主要试剂 | 第73-74页 |
6.1.2 主要仪器 | 第74-75页 |
6.2 主要试剂的配制 | 第75-76页 |
6.2.1 4%多聚甲醛 | 第75页 |
6.2.2 蛋白裂解液 | 第75页 |
6.2.3 1 ×电泳缓冲液(runningbuffer) | 第75页 |
6.2.4 转膜液(trans-buffer) | 第75页 |
6.2.5 1 ×TBS | 第75页 |
6.2.6 1%TBST | 第75-76页 |
6.2.7 封闭液 | 第76页 |
6.2.8 10%SDS溶液 | 第76页 |
6.2.9 10%APS溶液 | 第76页 |
6.3 研究对象与分组 | 第76-77页 |
6.3.1 实验动物饲养 | 第76页 |
6.3.2 动物分组及模型的建立 | 第76-77页 |
6.4 蛋白提取及定量 | 第77页 |
6.5 westernblot检测 | 第77页 |
6.6 ELISA检测 | 第77-78页 |
6.7 免疫组织化学染色 | 第78-79页 |
6.7.1 石蜡包埋于切片 | 第78页 |
6.7.2 染色 | 第78-79页 |
6.8 统计学分析 | 第79-80页 |
7 结果 | 第80-93页 |
7.1 上游阻断4-1BB信号通路可减少矽尘暴露小鼠肺组织中促炎和促纤维化因子的分泌 | 第80-86页 |
7.1.1 上游阻断4-1BB信号通路可有效阻断矽尘所致肺部4-1BB信号通路的激活 | 第80-81页 |
7.1.2 上游阻断4-1BB信号通路可减少矽尘暴露小鼠肺组织中MMP9和MMP12的表达 | 第81-84页 |
7.1.3 上游阻断4-1BB信号通路可减少矽尘暴露小鼠肺组织中促炎和促纤维化细胞因子的分泌 | 第84-86页 |
7.2 下游阻断4-1BB信号通路可减少矽尘暴露小鼠肺组织中促炎和促纤维化因子的分泌 | 第86-93页 |
7.2.1 下游阻断4-1BB信号通路可减少矽尘暴露小鼠肺组织中MMP9和MMP12的表达 | 第86-91页 |
7.2.2 下游阻断4-1BB信号通路可减轻矽尘所致肺组织纤维化 | 第91-93页 |
8 讨论 | 第93-97页 |
9 结论 | 第97-98页 |
对本研究创新性的自我评价 | 第98-99页 |
参考文献 | 第99-106页 |
综述 | 第106-123页 |
参考文献 | 第112-123页 |
攻读学位期间取得的研究成果 | 第123-124页 |
致谢 | 第124-125页 |
个人简历 | 第125页 |