| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 研究背景 | 第10页 |
| 1.2 抗血栓药物研究发展概况 | 第10-14页 |
| 1.2.1 临床上使用的抗血栓药物 | 第10-14页 |
| 1.2.1.1 抗血小板药物 | 第10页 |
| 1.2.1.2 抗凝治疗 | 第10-11页 |
| 1.2.1.3 溶栓剂 | 第11-14页 |
| 1.3 纳豆激酶 | 第14-18页 |
| 1.3.1 纳豆激酶的性质 | 第14-18页 |
| 1.3.1.1 纳豆激酶的稳定性 | 第14页 |
| 1.3.1.2 纳豆激酶的等电点及分子量 | 第14页 |
| 1.3.1.3 纳豆激酶的基因结构 | 第14-15页 |
| 1.3.1.4 纳豆激酶的底物特异性 | 第15页 |
| 1.3.1.5 纳豆激酶的纤溶效果实验 | 第15-16页 |
| 1.3.1.6 纳豆激酶作为溶栓药物的优点 | 第16-17页 |
| 1.3.1.7 高产纳豆激酶发酵工艺的研究 | 第17-18页 |
| 1.4 本课题研究的目的、意义及主要内容 | 第18-19页 |
| 第二章 纳豆芽孢杆菌纳豆激酶基因的验证 | 第19-29页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 试验菌种 | 第19页 |
| 2.1.2 主要药品和试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.3 使用引物 | 第20页 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 | 第20页 |
| 2.1.5 培养基 | 第20-21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-23页 |
| 2.2.1 冻干管的活化 | 第21页 |
| 2.2.2 细菌总DNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.3 细菌纳豆激酶基因的克隆 | 第22页 |
| 2.2.4 PCR扩增产物清洁回收 | 第22页 |
| 2.2.5 PCR扩增产物序列分析 | 第22-23页 |
| 2.3 结果与分析 | 第23-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 产纳豆激酶固态发酵培养基和固态发酵工艺的优化 | 第29-33页 |
| 3.1 材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 试验菌种 | 第29页 |
| 3.1.2 原料 | 第29页 |
| 3.1.3 试剂 | 第29-30页 |
| 3.1.4 试验仪器 | 第30页 |
| 3.2 方法 | 第30-33页 |
| 3.2.1 纤溶酶活性测定方法(纤维蛋白平板法) | 第30页 |
| 3.2.2 纤维蛋白平板法的优化 | 第30页 |
| 3.2.3 尿激酶标准曲线的制作 | 第30-31页 |
| 3.2.4 纳豆芽孢杆菌的生长曲线 | 第31页 |
| 3.2.5 固体发酵产纳豆激酶的培养基优化 | 第31-32页 |
| 3.2.5.1 多种不同培养基及菌种的选择 | 第31页 |
| 3.2.5.2 以A、B和C为固体培养基的正交试验 | 第31页 |
| 3.2.5.3 以A为固体培养基添加少量碳源对产酶的影响 | 第31页 |
| 3.2.5.4 以A为固体培养基添加少量氮源对产酶的影响 | 第31-32页 |
| 3.2.6 纳豆激酶固态发酵的发酵工艺优化 | 第32-33页 |
| 3.2.6.1 初始含水量的确定 | 第32页 |
| 3.2.6.2 接种量的确定 | 第32页 |
| 3.2.6.3 装料量的确定 | 第32页 |
| 3.2.6.4 初始pH的确定 | 第32页 |
| 3.2.6.5 培养温度的确定 | 第32页 |
| 3.2.6.6 发酵过程中菌数与酶活的关系 | 第32页 |
| 3.2.6.7 接种种龄的确定 | 第32页 |
| 3.2.6.8 培养基灭菌时间的选择 | 第32-33页 |
| 3.2.6.9 发酵后烘干温度对酶活的影响 | 第33页 |
| 3.2.6.10 响应面优化 | 第33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-54页 |
| 3.3.1 纤维蛋白平板法的优化 | 第33-34页 |
| 3.3.1.1 不同缓冲液试验结果 | 第33-34页 |
| 3.3.1.2 不同浓度的PBS磷酸盐缓冲液试验结果 | 第34页 |
| 3.3.2 尿激酶标准曲线 | 第34-36页 |
| 3.3.3 纳豆芽孢杆菌生长曲线 | 第36-37页 |
| 3.3.4 纳豆激酶固态发酵培养基的优化 | 第37-40页 |
| 3.3.4.1 多种固体培养基的选择 | 第37页 |
| 3.3.4.2 以A、B和C为固体培养基的正交试验结果 | 第37-38页 |
| 3.3.4.3 正交实验的效应曲线图 | 第38-39页 |
| 3.3.4.4 向固体培养基中添加各种碳源对纳豆激酶酶活的影响 | 第39页 |
| 3.3.4.5 向固体培养基中添加氮源对纳豆激酶酶活的影响 | 第39-40页 |
| 3.3.5 纳豆激酶固态发酵工艺的优化 | 第40-52页 |
| 3.3.5.1 初始含水量的确定 | 第40页 |
| 3.3.5.2 接种量对产酶的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.5.3 加料量的确定 | 第41-42页 |
| 3.3.5.4 初始pH的确定 | 第42页 |
| 3.3.5.5 培养温度的确定 | 第42-43页 |
| 3.3.5.6 发酵过程中菌数与酶活的关系 | 第43-44页 |
| 3.3.5.7 接种种龄的确定 | 第44页 |
| 3.3.5.8 发酵时培养基灭菌时间的选择 | 第44-45页 |
| 3.3.5.9 发酵后烘干温度对酶活的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.5.10 响应面优化 | 第46-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-54页 |
| 3.4.1 纤维蛋白平板法的优化 | 第52页 |
| 3.4.2 多种固体培养基的选择 | 第52页 |
| 3.4.3 A、B和C添加量对产酶的影响 | 第52页 |
| 3.4.4 发酵工艺条件对纳豆激酶酶活的影响 | 第52-53页 |
| 3.4.5 响应面优化 | 第53-54页 |
| 第四章 纳豆激酶溶解血栓试验 | 第54-61页 |
| 4.1 材料 | 第54页 |
| 4.1.1 试剂 | 第54页 |
| 4.1.2 纳豆激酶冻干粉 | 第54页 |
| 4.1.3 实验动物 | 第54页 |
| 4.1.4 仪器 | 第54页 |
| 4.2 方法 | 第54-56页 |
| 4.2.1 半数致死量的确定 | 第54-55页 |
| 4.2.2 凝血时间的测定 | 第55页 |
| 4.2.3 纳豆激酶对角叉菜胶建模小鼠血栓的作用 | 第55页 |
| 4.2.4 纳豆激酶体外抗血栓试验 | 第55-56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-59页 |
| 4.3.1 半数致死量的确定 | 第56页 |
| 4.3.2 凝血时间的测定 | 第56-57页 |
| 4.3.3 纳豆激酶对角叉菜胶建模小鼠血栓的作用 | 第57-59页 |
| 4.3.4 纳豆激酶体外抗血栓试验 | 第59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 结论及展望 | 第61-63页 |
| 5.1 结论 | 第61页 |
| 5.2 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
