| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-34页 |
| 1 大豆含硫氨基酸的研究进展 | 第14-21页 |
| 1.1 硫元素在生命活动中的作用 | 第14-16页 |
| 1.2 硫代谢中的关键基因 | 第16-18页 |
| 1.3 大豆含硫氨基酸研究简况 | 第18-19页 |
| 1.4 大豆含硫氨基酸的诱变育种研究 | 第19页 |
| 1.5 大豆含硫氨基酸及在转基因方面的研究 | 第19-20页 |
| 1.6 CBL基因的研究简况 | 第20-21页 |
| 2 RNAi的研究进展 | 第21-24页 |
| 2.1 RNAi技术的发展 | 第22页 |
| 2.2 RNAi的作用机制 | 第22-23页 |
| 2.3 RNAi技术的特征 | 第23页 |
| 2.4 RNAi技术的应用 | 第23-24页 |
| 3 大豆遗传转化体系的研究 | 第24-32页 |
| 3.1 植物遗传转化 | 第24-27页 |
| 3.1.1 农杆菌介导法 | 第25-26页 |
| 3.1.2 病毒介导法 | 第26页 |
| 3.1.3 基因枪法 | 第26-27页 |
| 3.1.4 其他方法 | 第27页 |
| 3.2 标记基因 | 第27-29页 |
| 3.2.1 选择基因 | 第28页 |
| 3.2.2 报告基因 | 第28-29页 |
| 3.3 大豆遗传转化系统 | 第29-30页 |
| 3.3.1 大豆体细胞胚发生再生系统 | 第29页 |
| 3.3.2 大豆原生质体再生途径 | 第29页 |
| 3.3.3 大豆器官发生途径 | 第29-30页 |
| 3.4 大豆遗传转化应用基因的种类 | 第30-31页 |
| 3.4.1 抗病虫基因 | 第30页 |
| 3.4.2 抗逆性基因 | 第30页 |
| 3.4.3 标记基因 | 第30-31页 |
| 3.4.4 优良品质基因 | 第31页 |
| 3.5 可能的障碍及研究前景 | 第31-32页 |
| 4 展望 | 第32-34页 |
| 第二章 野生大豆GsCBL基因的克隆及植物表达载体的构建 | 第34-46页 |
| 1 材料与方法 | 第34-39页 |
| 1.1 材料 | 第34-35页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第34页 |
| 1.1.3 试剂 | 第34页 |
| 1.1.4 供试菌株和载体 | 第34-35页 |
| 1.2 方法与步骤 | 第35-39页 |
| 1.2.1 大豆总RNA的提取 | 第35页 |
| 1.2.2 cDNA第一链合成 | 第35-36页 |
| 1.2.3 GsCBL基因的克隆 | 第36页 |
| 1.2.4 连接、转化及转化子的蓝白斑筛选 | 第36-37页 |
| 1.2.5 质粒DNA的提取 | 第37-38页 |
| 1.2.6 GsCBL基因序列分析 | 第38页 |
| 1.2.7 荧光定量的组织表达分析 | 第38-39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-44页 |
| 2.1 GsCBL全长cDNA的克隆 | 第39-40页 |
| 2.2 GsCBL基因序列相关生物信息学分析 | 第40-44页 |
| 2.2.1 GsCBL基因序列的分析 | 第40-41页 |
| 2.2.2 Motif预测 | 第41页 |
| 2.2.3 蛋白信号肽预测 | 第41-43页 |
| 2.2.4 跨膜区域分析 | 第43-44页 |
| 2.3 GsCBL基因的表达分析 | 第44页 |
| 3 讨论 | 第44-46页 |
| 第三章 大豆CBL基因过表达及干扰载体的构建 | 第46-56页 |
| 1 材料与方法 | 第46-51页 |
| 1.1 材料 | 第46页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第46页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第46页 |
| 1.1.3 试剂 | 第46页 |
| 1.1.4 供试菌株和载体 | 第46页 |
| 1.2 方法 | 第46-51页 |
| 1.2.1 大豆基因组RNA的提取 | 第46-47页 |
| 1.2.2 cDNA第一链合成 | 第47页 |
| 1.2.3 RNAi目标区段选择及引物设计 | 第47页 |
| 1.2.4 利用Gateway技术构建RNAi载体 | 第47-49页 |
| 1.2.5 Gateway体系构建植物过表达载体 | 第49页 |
| 1.2.6 表达载体导入根癌农杆菌 | 第49-51页 |
| 2 结果分析 | 第51-55页 |
| 2.1 GmCBL干扰片段的克隆 | 第51页 |
| 2.2 干扰片段的BP反应及阳性克隆检测 | 第51-52页 |
| 2.3 干扰片段的LR反应及阳性克隆检测 | 第52-53页 |
| 2.4 植物干扰表达载体转化根癌农杆菌的检测 | 第53页 |
| 2.5 Gateway系统构建植物过表达载体 | 第53-55页 |
| 3 讨论 | 第55-56页 |
| 第四章 农杆菌介导的遗传转化 | 第56-64页 |
| 1 材料与方法 | 第56-59页 |
| 1.1 材料 | 第56页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第56页 |
| 1.1.2 质粒与菌株 | 第56页 |
| 1.1.3 试剂 | 第56页 |
| 1.2 方法 | 第56-58页 |
| 1.3 外植体制备中影响因素的实验 | 第58-59页 |
| 1.3.1 灭菌时间对大豆杀菌的效果 | 第58页 |
| 1.3.2 灭菌时间对大豆种子萌发的影响 | 第58页 |
| 1.3.3 共培养时间对从生芽生长状况的影响 | 第58页 |
| 1.3.4 大豆对筛选标记潮霉素的敏感性研究 | 第58-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-63页 |
| 2.1 外植体制备中影响因素分析 | 第59-61页 |
| 2.1.1 灭菌时间对大豆杀菌的效果 | 第59-60页 |
| 2.1.2 灭菌时间对大豆种子萌发的影响 | 第60页 |
| 2.1.3 共培养时间的影响 | 第60-61页 |
| 2.1.4 潮霉素敏感性研究 | 第61页 |
| 2.2 GmCBL干扰载体的大豆遗传转化 | 第61-63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| 全文结论 | 第64-66页 |
| 附录 | 第66-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文和专利 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86页 |