| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 研究背景 | 第11-17页 |
| 1.1.1 高等植物中叶绿素的研究 | 第11-14页 |
| 1.1.2 镁离子螯合酶的研究近况 | 第14-15页 |
| 1.1.3 植物体中对硫氧还蛋白的研究 | 第15-17页 |
| 1.2 问题的提出 | 第17-18页 |
| 1.3 课题研究内容 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-35页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.2 质粒和菌种 | 第19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-35页 |
| 2.2.1 材料的培养 | 第20页 |
| 2.2.2 豌豆chlI基因的克隆 | 第20-23页 |
| 2.2.2.1 设计兼并引物克隆chlI基因的同源序列 | 第20-21页 |
| 2.2.2.2 PCR法从豌豆叶片cDNAλgt11噬菌体文库中筛选豌豆chlI基因 | 第21-22页 |
| 2.2.2.3 5'RACE实验得到完整的豌豆chlI基因 | 第22-23页 |
| 2.2.3 豌豆chlI基因和trx-f基因的体外表达纯化及活性影响 | 第23-29页 |
| 2.2.3.1 原核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.3.2 融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.3.3 Trx-f蛋白对CHLI的ATPase活性影响 | 第25-26页 |
| 2.2.3.4 Trx-f蛋白对镁离子螯合酶活性的影响 | 第26-28页 |
| 2.2.3.5 用纯化的蛋白免疫兔子制备兔抗 | 第28-29页 |
| 2.2.4 酵母双杂交研究Trx-f蛋白与镁离子螯合酶各亚基的相互作用 | 第29-30页 |
| 2.2.4.1 酵母双杂交系统中AD/BD载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.4.2 酵母转化 | 第30页 |
| 2.2.5 利用VIGS技术分析chlI和trx-f基因的功能 | 第30-35页 |
| 2.2.5.1 VIGS载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.5.2 农杆菌介导的转化 | 第31-32页 |
| 2.2.5.3 确定各抑制植株中沉默基因在转录水平上的变化 | 第32页 |
| 2.2.5.4 分析各基因抑制植株中镁离子螯合酶活性的变化 | 第32-33页 |
| 2.2.5.5 分析各基因抑制植株中几个关键色素含量的变化 | 第33-34页 |
| 2.2.5.6 分析各基因抑制植株中与抗逆有关的酶活性变化 | 第34-35页 |
| 3 结果分析 | 第35-51页 |
| 3.1 豌豆chlI基因的克隆 | 第35-43页 |
| 3.1.1 兼并引物扩增豌豆chlI基因的部分片段 | 第35-36页 |
| 3.1.2 PCR方法筛选豌豆cDNA λgt11噬菌体文库 | 第36-39页 |
| 3.1.3 5'RACE实验得到chlI基因的完整序列 | 第39-43页 |
| 3.2 蛋白的表达纯化及活性检测 | 第43-46页 |
| 3.2.1 CHLI和Trx-f蛋白的表达纯化 | 第43-44页 |
| 3.2.2 Trx-f蛋白对CHLI亚基蛋白的ATPase活性影响 | 第44-45页 |
| 3.2.3 Trx-f蛋白对Mg-chelatase活性的影响 | 第45-46页 |
| 3.3 Trx-f蛋白与镁离子螫合酶各亚基的相互作用 | 第46-47页 |
| 3.4 VIGS技术研究chlI基因和trx-f基因的功能 | 第47-51页 |
| 3.4.1 植株的表型变化 | 第47-49页 |
| 3.4.2 VIGS-chlI和VIGS-trx-f植株中镁离子螯合酶活性的变化 | 第49页 |
| 3.4.3 VIGS-chlI和VIGS-trx-f植株的光合色素合成能力 | 第49-50页 |
| 3.4.4 VIGS-trx-f植株的抗逆性酶合成能力 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-56页 |
| 4.1 豌豆Trx-f蛋白对镁离子螯合酶Ⅰ亚基ATP酶活性的影响 | 第52页 |
| 4.2 豌豆Trx-f蛋白对豌豆镁离子螯合酶活性的影响 | 第52-53页 |
| 4.3 Trx-f蛋白与镁离子螯合酶各个亚基的相互作用 | 第53-54页 |
| 4.4 利用VIGS技术在豌豆植物体内研究Trx-f蛋白的功能 | 第54-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录 | 第64-68页 |
| 1 Reagents for screening λgt11 cDNA library | 第64页 |
| 2 Reagents for plasmid DNA extraction | 第64-65页 |
| 3 Reagents for protein purification | 第65-66页 |
| 4 Reagents for yeast two-hybrid | 第66-67页 |
| 5 Reagents for VIGS | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
