| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 一、引言 | 第9-21页 |
| 1. 稻瘟病菌的研究进展 | 第9-13页 |
| 1.1 稻瘟病菌的研究背景及重要性 | 第9页 |
| 1.2 稻瘟病菌的侵染循环过程 | 第9-10页 |
| 1.3 稻瘟病菌的国内外研究现状 | 第10-11页 |
| 1.4 稻瘟病菌效应子的研究现状 | 第11-13页 |
| 2. 分支酸变位酵的研究进展 | 第13-20页 |
| 2.1 分支酸变位酶的反应机制及其在莽草酸途径中的作用 | 第13-14页 |
| 2.2 分支酸变位酶家族的结构和功能分类 | 第14-15页 |
| 2.3 分支酸变位酶在不同生物体的功能和结构分析 | 第15-20页 |
| 2.3.1 分支酸变位酶在细菌中的研究 | 第15-16页 |
| 2.3.2 分支酸变位酶在真核细胞中的研究 | 第16页 |
| 2.3.3 分支酸变位酶在植物中的研究 | 第16-18页 |
| 2.3.4 分支酸变位酶在寄生线虫中的研究 | 第18-19页 |
| 2.3.5 分支酸变位酶在致病性真菌中的研究 | 第19-20页 |
| 3. 本研究的意义 | 第20-21页 |
| 二、材料方法 | 第21-33页 |
| 1. 材料 | 第21-22页 |
| 1.1 实验质粒、菌株 | 第21页 |
| 1.2 植物材料 | 第21页 |
| 1.3 培养基 | 第21页 |
| 1.4 生化试剂 | 第21-22页 |
| 2 方法 | 第22-33页 |
| 2.1 生物信息学分析 | 第22页 |
| 2.1.1 分支酸变位酶蛋白序列获得与分析 | 第22页 |
| 2.1.2 分支酸变位酶进化关系分析 | 第22页 |
| 2.2 PCR扩增目的片段与SOE-PCR获得转化片段 | 第22-23页 |
| 2.2.1 本实验PCR所采用的引物序列及用途 | 第22页 |
| 2.2.2 目的片段的扩增和同源片段的拼接 | 第22-23页 |
| 2.3 稻瘟病菌原生质体的制备 | 第23-24页 |
| 2.4 稻瘟病菌原生质体转化 | 第24-25页 |
| 2.5 稻瘟病菌基因组DNA的提取及提取质量检测 | 第25页 |
| 2.6 稻瘟病菌菌丝体total RNA的提取及RT-PCR | 第25-26页 |
| 2.6.1 稻瘟病菌菌丝体total RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.6.2 RT-PCR得到第一链cDNA | 第26页 |
| 2.7 稻瘟病菌互补载体的构建 | 第26-28页 |
| 2.7.1 质粒酶切与连接 | 第26-28页 |
| 2.7.2 感受态细胞的转化 | 第28页 |
| 2.7.3 质粒DNA的提取 | 第28页 |
| 2.8 Southern blot验证ΔMoCM和MoCM-Com | 第28-31页 |
| 2.9 稻瘟病菌敲除突变体的基本表型分析 | 第31-33页 |
| 2.9.1 稻瘟病菌生长速率的测定 | 第31页 |
| 2.9.2 稻瘟病菌产孢量统计和细胞形态观察 | 第31-32页 |
| 2.9.3 孢子萌发及附着胞形成实验 | 第32页 |
| 2.9.4 洋葱表皮内侵染结构观察 | 第32页 |
| 2.9.5 致病性分析 | 第32-33页 |
| 2.9.5.1 大麦致病性分析 | 第32-33页 |
| 2.9.5.2 水稻致病性分析 | 第33页 |
| 三、结果与分析 | 第33-47页 |
| 1. 稻瘟病菌MoCM的生物信息学分析 | 第33-35页 |
| 1.1 稻瘟病菌MoCM功能域的保守性验证 | 第33-34页 |
| 1.2 真菌中CM的进化关系分析 | 第34-35页 |
| 2 MoCM敲除突变体及其互补菌株的获得 | 第35-39页 |
| 2.1 敲除突变体的获得 | 第35-37页 |
| 2.1.1 ΔMoCM的筛选与PCR验证 | 第35-36页 |
| 2.1.2 RT-PCR分析ΔMoCM中CM的表达量 | 第36-37页 |
| 2.2 互补突变体菌株的筛选与验证 | 第37-39页 |
| 2.3 Southern blot验证ΔMoCM和MoCM-Com | 第39页 |
| 3 敲除突变体菌株和互补菌株的基本表型分析 | 第39-44页 |
| 3.1 MoCM敲除突变体影响稻瘟病菌气生菌丝的形态 | 第39-41页 |
| 3.2 MoCM敲除突变体影响稻瘟病菌分生孢子梗的数量 | 第41-42页 |
| 3.3 MoCM的敲除使孢子的萌发和附着胞形成延迟及穿透率的下降 | 第42-43页 |
| 3.4 致病性分析 | 第43-44页 |
| 3.4.1 洋葱表皮侵染实验 | 第43页 |
| 3.4.2 大麦离体接种致病性分析 | 第43页 |
| 3.4.3 水稻喷雾接种致病性分析 | 第43-44页 |
| 4. 带有GFP、mCherry+NLS荧光标签的互补菌株中MoCM蛋白的亚细胞定位 | 第44-47页 |
| 四、结论与讨论 | 第47-51页 |
| 1 稻瘟病菌中MoCM蛋白特性的分析 | 第47-50页 |
| 1.1 不同真菌中MoCM蛋白的进化关系比较 | 第47页 |
| 1.2 MoCM蛋白的对稻瘟病菌生长发育的影响 | 第47-50页 |
| 1.3 MoCM蛋白对稻瘟病菌致病性的影响 | 第50页 |
| 2 后续实验 | 第50页 |
| 3 研究的意义及展望 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录1 | 第58-59页 |
| 附录2 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
