| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 稻瘟病 | 第12页 |
| 1.2 稻瘟病菌 | 第12-13页 |
| 1.2.1 稻瘟病菌的特征 | 第12页 |
| 1.2.2 稻瘟病菌的侵染机制 | 第12-13页 |
| 1.2.3 稻瘟病菌基因研究 | 第13页 |
| 1.3 PAK家族蛋白 | 第13-16页 |
| 1.3.1 PAK家族种类 | 第13-14页 |
| 1.3.2 PAK蛋白结构 | 第14页 |
| 1.3.3 PAK活化机制 | 第14-15页 |
| 1.3.4 PAK生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.4 GVP36蛋白相关研究 | 第16页 |
| 1.5 ZDS蛋白相关研究 | 第16-17页 |
| 1.6 BOI蛋白相关研究 | 第17-18页 |
| 1.7 本研究的意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验菌株及植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 实验质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 实验培养基 | 第20-22页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-36页 |
| 2.2.1 生物信息学方法 | 第22-23页 |
| 2.2.1.1 稻瘟病菌中Chm1相关蛋白的获得 | 第22页 |
| 2.2.1.2 目的蛋白氨基酸序列系统进化分析 | 第22-23页 |
| 2.2.2 稻瘟病菌基因敲除 | 第23-25页 |
| 2.2.2.1 稻瘟病菌基因敲除策略 | 第23页 |
| 2.2.2.2 稻瘟病菌基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2.3 稻瘟病菌原生质体的制备 | 第24-25页 |
| 2.2.2.4 转化稻瘟病菌原生质体及阳性克隆验证 | 第25页 |
| 2.2.3 敲除转化子的表型分析 | 第25-26页 |
| 2.2.3.1 菌落生长速度测定试验 | 第25页 |
| 2.2.3.2 产孢量统计试验 | 第25-26页 |
| 2.2.3.3 孢子萌发及附着胞形成试验 | 第26页 |
| 2.2.3.4 大麦离体接种试验(菌丝块) | 第26页 |
| 2.2.3.5 水稻活体喷雾接种试验(孢子液) | 第26页 |
| 2.2.4 酵母双杂 | 第26-29页 |
| 2.2.4.1 供试载体(BD载体)的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.4.2 酵母感受态细胞的制备和转化 | 第27-28页 |
| 2.2.4.3 MoGvp36-BD,MoZds2-BD和MoBoi2-BD自激活试验 | 第28-29页 |
| 2.2.4.4 MoGvp36-BD,MoZds2-BD和MoBoi2-BD重组质粒对AH109细胞毒性检测 | 第29页 |
| 2.2.5 稻瘟病菌总RNA的提取(菌丝体) | 第29-30页 |
| 2.2.6 PCR,逆转录RT-PCR及荧光定量PCR(qRT) | 第30-32页 |
| 2.2.7 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第32-33页 |
| 2.2.8 质粒DNA的提取 | 第33页 |
| 2.2.9 质粒酶切与连接 | 第33-34页 |
| 2.2.10 高通量iTRAQ技术 | 第34-35页 |
| 2.2.11 RNA-SEQ技术 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-57页 |
| 3.1 稻瘟病菌中Chm1相关蛋白的生物信息学预测 | 第36-37页 |
| 3.2 MoGvp36,MoZds2和MoBoi2生物信息学分析 | 第37-43页 |
| 3.2.1 MoGvp36生物信息学分析 | 第37-39页 |
| 3.2.1.1 MoGvp36同源蛋白系统进化分析 | 第37-38页 |
| 3.2.1.2 MoGvp36蛋白亚细胞定位分析 | 第38-39页 |
| 3.2.2 MoZds2生物信息学分析 | 第39-41页 |
| 3.2.2.1 MoZds2同源蛋白系统进化树分析 | 第39页 |
| 3.2.2.2 MoZds2蛋白亚细胞定位分析 | 第39-41页 |
| 3.2.3 MoBoi2生物信息学分析 | 第41-43页 |
| 3.2.3.1 MoBoi2同源蛋白系统进化树分析 | 第41页 |
| 3.2.3.2 MoBoi2蛋白亚细胞定位分析 | 第41-43页 |
| 3.3 Chml突变体中相关基因的相对表达量分析 | 第43页 |
| 3.4 MoGvp36,MoZds2,MoBoi2功能分析 | 第43-51页 |
| 3.4.1 目的基因突变体的获得 | 第43-44页 |
| 3.4.2 MoGvp36基因功能分析 | 第44-47页 |
| 3.4.2.1 MoGvp36突变体的菌落形态观察及生长速度测定 | 第44-45页 |
| 3.4.2.2 MoGvp36突变体的产孢量统计 | 第45页 |
| 3.4.2.3 MoGvp36突变体的孢子萌发率及附着胞形成 | 第45-46页 |
| 3.4.2.4 MoGvp36突变体的致病性分析 | 第46-47页 |
| 3.4.3 MoZds2基因功能分析 | 第47-49页 |
| 3.4.3.1 MoZds2突变体的菌落形态观察及生长速度测定 | 第47页 |
| 3.4.3.2 MoZds2突变体的产孢量统计 | 第47-48页 |
| 3.4.3.3 MoZds2突变体的孢子萌发率及附着胞形成 | 第48-49页 |
| 3.4.3.4 MoZds2突变体的致病性分析 | 第49页 |
| 3.4.4 MoBoi2基因功能分析 | 第49-51页 |
| 3.4.4.1 MoBoi2突变体的菌落形态观察及生长速度测定 | 第49-50页 |
| 3.4.4.2 MoBoi2突变体的产孢量统计 | 第50页 |
| 3.4.4.3 MoBoi2突变体的孢子萌发率及附着胞形成 | 第50-51页 |
| 3.4.4.4 MoBoi2突变体的致病性分析 | 第51页 |
| 3.5 酵母双杂验证目的蛋白与Chml的互作关系 | 第51-54页 |
| 3.5.1 目的蛋白BD载体的构建 | 第51-52页 |
| 3.5.2 目的蛋白BD载体自激活试验 | 第52-53页 |
| 3.5.3 酵母双杂验证互作实验 | 第53-54页 |
| 3.6 MoGvp36,MoZds2,MoBoi2突变体背景下Chml的表达水平 | 第54页 |
| 3.7 iTRAQ和RNA-SEQ关联分析筛选Chm1相关的产孢基因 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 MoGvp36,MoZds2,MoBoi2与Chm1的关系 | 第57页 |
| 4.2 关于MoGvp36功能的探讨 | 第57页 |
| 4.3 关于MoZds2功能的探讨 | 第57-58页 |
| 4.4 关于MoBoi2功能的探讨 | 第58页 |
| 4.5 关于Chm1其他相关蛋白的探讨 | 第58-60页 |
| 5 展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
