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黏型小麦雄性不育系线粒体嵌合基因的克隆与表达及其mtDNA消减文库的构建

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-11页
第一章 文献综述第11-27页
   ·植物雄性不育与小麦杂种优势利用研究概况第11-14页
     ·植物雄性不育的研究概况第11页
     ·小麦杂种优势利用研究概况第11-14页
   ·植物细胞质雄性不育机制的研究第14-22页
     ·细胞质雄性不育的细胞学研究第14-15页
     ·细胞质雄性不育的生理生化研究第15-17页
     ·细胞质雄性不育的分子生物学研究第17-22页
   ·差异表达技术在雄性不育机理研究中的应用第22-25页
     ·差异显示反转录PCR 技术(DDRT-PCR)第22页
     ·cDNA-AFLP 技术第22-23页
     ·抑制消减杂交技术第23-24页
     ·定量PCR第24-25页
   ·本实验选题的目的和意义第25-27页
第二章 黏型小麦细胞质雄性不育线粒体嵌合基因的克隆第27-40页
   ·试验材料及其处理第27-28页
   ·主要生化试剂第28页
   ·主要试验仪器第28页
   ·实验中所涉及引物第28页
   ·试验方法第28-34页
     ·小麦线粒体基因组DNA(mtDNA)的提取第28-29页
     ·小麦叶片、花药总RNA 的提取第29-30页
     ·小麦叶片和花药总RNA 的纯化第30-31页
     ·一链cDNA 的合成第31页
     ·小麦嵌合基因的扩增第31-32页
     ·目的片段的回收第32页
     ·目的片段的转化与克隆第32-34页
     ·序列比较分析第34页
   ·结果与分析第34-39页
     ·线粒体DNA 的质量检测第34-35页
     ·小麦叶片和花药总RNA 质量检测第35页
     ·小麦嵌合基因的线粒体DNA 及cDNA 扩增结果第35-36页
     ·小麦orf256~(kot) 和orf260~(kot) 基因的扩增序列分析第36-39页
   ·讨论第39-40页
第三章 黏型小麦细胞质雄性不育线粒体嵌合基因定量表达分析第40-46页
   ·试验材料及其处理第40页
   ·主要试剂第40页
   ·主要试验仪器第40页
   ·实验中所涉及引物第40页
   ·试验方法第40-42页
     ·小麦叶片、花药总RNA 的提取,纯化及一连的合成第40-41页
     ·目的基因的半定量扩增第41页
     ·嵌合基因orf256 的荧光定量PCR 扩增第41-42页
     ·荧光定量PCR 结果分析第42页
   ·结果与分析第42-44页
     ·coxI、orf260~(kot)—coxI、orf256~(kot)—coxI 半定量分析结果第43页
     ·orf256~(kot) 基因和orf260~(kot) 基因实时荧光定量表达的结果分析第43-44页
     ·半定量和实时荧光定量结果的综合分析第44页
   ·讨论第44-46页
第四章 黏型小麦细胞质雄性不育系 mtDNA 消减文库的初步构建第46-50页
   ·实验方法第46-47页
     ·重新进行第二轮PCR 扩增第46页
     ·PCR 产物的胶回收第46页
     ·目的片段的转化与克隆第46-47页
     ·阳性克隆检测第47页
     ·序列分析第47页
   ·结果与分析第47-50页
     ·第二轮PCR 产物的鉴定第47-48页
     ·SSH 文库的阳性重组质粒的鉴定第48页
     ·差异片段EST 的序列分析第48-50页
第五章 结论第50-51页
参考文献第51-60页
附录1 常用溶液配方第60-62页
附录2 缩略词与英汉对照第62-63页
致谢第63-64页
作者简介第64页

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