| 缩略语表 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 文献回顾 | 第15-23页 |
| 第一部分RIP3表达水平与胰腺癌病人生存分析 | 第23-27页 |
| 1 材料 | 第23页 |
| 1.1 组织样本数据 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23页 |
| 2.1 胰腺癌病人生存分析 | 第23页 |
| 3 结果 | 第23-25页 |
| 3.1 RIP3的表达与患者总体生存时间显著相关。 | 第23-25页 |
| 4 讨论 | 第25-27页 |
| 第二部分 胰腺癌细胞筛选及死亡方式检测 | 第27-39页 |
| 1 材料 | 第27-29页 |
| 1.1 细胞系 | 第27页 |
| 1.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 1.3 主要缓冲液 | 第28页 |
| 1.4 主要实验器材 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-33页 |
| 2.1 细胞培养 | 第29页 |
| 2.2 程序性坏死发生器筛选，RIP3表达水平检测（Western blot） | 第29-31页 |
| 2.3 流式细胞术检测细胞死亡（细胞加药处理及流式细胞术） | 第31页 |
| 2.4 程序性坏死模型构建及流式细胞术分析（细胞加药处理及流式细胞术） | 第31页 |
| 2.5 western blot检测两种死亡模型caspase活化水平 | 第31-32页 |
| 2.6 Annexin V-FITC、PI、CD147-PerCP三染 | 第32页 |
| 2.7 透射电镜制片与观察 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-37页 |
| 3.1 胰腺癌细胞CFPAC-1 具备能够发生凋亡和程序性坏死的潜能 | 第33-34页 |
| 3.2 吉西他滨能够诱导CFPAC-1 细胞发生凋亡和程序性坏死 | 第34-37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 第三部分 胰腺癌耐药细胞株的诱导及鉴定 | 第39-46页 |
| 1 材料 | 第39-41页 |
| 1.1 细胞系 | 第39页 |
| 1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 1.3 主要缓冲液 | 第40页 |
| 1.4 主要实验器材 | 第40-41页 |
| 2 方法 | 第41-43页 |
| 2.1 细胞培养 | 第41页 |
| 2.2 胰腺癌细胞CFAPC-1 吉西他滨的半数致死浓度的确定(wst1检测细胞增殖) | 第41页 |
| 2.3 胰腺癌细胞CFAPC-1 吉西他滨耐药细胞株的诱导 | 第41-42页 |
| 2.4 耐药细胞鉴定 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-45页 |
| 3.1 吉西他滨诱导CFPAC-1 获得的耐药细胞株R1、R2能够抵抗凋亡和程序性坏死 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 第四部分 胰腺癌耐药细胞株耐药机制研究 | 第46-70页 |
| 1 材料 | 第46-49页 |
| 1.1 细胞系 | 第46页 |
| 1.2 主要试剂 | 第46-48页 |
| 1.3 主要缓冲液 | 第48页 |
| 1.4 主要实验器材 | 第48-49页 |
| 2 方法 | 第49-57页 |
| 2.1 细胞培养 | 第49页 |
| 2.2 CFPAC-1、R1、R2细胞死亡相关蛋白表达水平检测 | 第49页 |
| 2.3 实时定量PCR检测CFPAC-1、R1、R2细胞RIP3、CD147转录水平差异 | 第49-51页 |
| 2.4 细胞免疫荧光染色 | 第51-52页 |
| 2.5 吉西他滨处理前后细胞线粒体荧光强度分析 | 第52页 |
| 2.6 RIP3 cDNA测序 | 第52-54页 |
| 2.7 RNA干涉 | 第54-55页 |
| 2.8 Annexin V-FITC、PI双染流式细胞术检测细胞死亡 | 第55页 |
| 2.9 western blot检测干涉前后蛋白表达水平变化 | 第55页 |
| 2.10 抗体阻断实验 | 第55页 |
| 2.11 Drp-1、p- Drp-1(S637)表达水平与细胞凋亡和程序性坏死 | 第55-56页 |
| 2.12 透射电镜观察线粒体形态与线粒体数量 | 第56页 |
| 2.13 Drp1二聚化水平检测 | 第56-57页 |
| 3 结果 | 第57-68页 |
| 3.1 RIP3、CD147、Drp-1 在耐药细胞株中高表达 | 第57-59页 |
| 3.2 干涉RIP3使吉西他滨诱导的胰腺癌耐药细胞株的死亡率增加 | 第59-60页 |
| 3.3 干涉CD147或者CD147抗体能够提高耐药细胞株R1对吉西他滨的敏感性 | 第60-62页 |
| 3.4 Drp-1 S637位去磷酸化及线粒体分裂参与了吉西他滨诱导的细胞死亡及胰腺癌的化疗耐药 | 第62-64页 |
| 3.5 耐药细胞株R1 RIP3 cDNA序列没有发生变化 | 第64-65页 |
| 3.6 RIP3作用于CD147、Bcl-2、Drp-1 上游，参与耐药细胞株的死亡抵抗 | 第65-66页 |
| 3.7 CD147分子抑制吉西他滨诱导的线粒体分裂 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| 小结 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 个人简历和研究成果 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
