| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 主要符号表 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 漆酶的性质、催化机理及应用 | 第13-17页 |
| 1.1.1 漆酶的来源及分布 | 第13-14页 |
| 1.1.2 漆酶的理化性质、结构特点和催化机理 | 第14-16页 |
| 1.1.3 漆酶的应用 | 第16-17页 |
| 1.2 漆酶基因的异源表达 | 第17-18页 |
| 1.3 CueO漆酶的性质及分子改造 | 第18-21页 |
| 1.4 本文的研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第22-37页 |
| 2.1 材料 | 第22-27页 |
| 2.1.1 Strains | 第22页 |
| 2.1.2 Plasmids | 第22页 |
| 2.1.3 培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.4 药品试剂 | 第23页 |
| 2.1.5 仪器和设备 | 第23-24页 |
| 2.1.6 实验所需试剂的配制方法 | 第24-27页 |
| 2.1.7 引物 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.2.1 yacK基因的获得 | 第27页 |
| 2.2.2 回收纯化目的DNA片段 | 第27-28页 |
| 2.2.3 PCR产物的酶切处理 | 第28页 |
| 2.2.4 质粒DNA的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.5 TB法制备大肠杆菌感受态 | 第29-30页 |
| 2.2.6 E. coli的常规转化、快速转化 | 第30页 |
| 2.2.7 表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.8 P. pastoris GS115感受态的制备及电转化 | 第31-32页 |
| 2.2.9 外源基因在毕赤酵母中的摇瓶表达 | 第32页 |
| 2.2.10 SDS-PAGE检测 | 第32-33页 |
| 2.2.11 Bradford法蛋白质浓度的测定 | 第33-34页 |
| 2.2.12 漆酶酶活的测定方法和染料脱色率的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.13 外源基因在毕赤酵母中的高密度发酵 | 第35-36页 |
| 2.2.14 漆酶CueO酶学性质的测定 | 第36-37页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第37-51页 |
| 3.1 漆酶yacK基因的克隆 | 第37-38页 |
| 3.2 pHBM905BDM-yacK表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 3.3 漆酶CueO-p在毕赤酵母中的摇瓶发酵和表征 | 第40-42页 |
| 3.4 漆酶CueO-p的纯化 | 第42-43页 |
| 3.5 温度对漆酶CueO-p活性的影响 | 第43-44页 |
| 3.5.1 漆酶CueO-p最适反应温度的测定 | 第43页 |
| 3.5.2 漆酶CueO-p热稳定性的测定 | 第43-44页 |
| 3.6 pH对漆酶CueO-p活性的影响 | 第44-45页 |
| 3.6.1 漆酶CueO-p最适反应pH的测定 | 第44页 |
| 3.6.2 漆酶CueO-p的pH稳定性的测定 | 第44-45页 |
| 3.7 金属离子对漆酶CueO-p活性的影响 | 第45页 |
| 3.8 抑制剂对漆酶CueO-p活性的影响 | 第45-46页 |
| 3.9 有机溶剂对漆酶CueO-p活性的影响 | 第46页 |
| 3.10 漆酶CueO-p高密度发酵 | 第46-47页 |
| 3.11 漆酶CueO-p对合成染料脱色 | 第47-48页 |
| 3.12 漆酶CueO-p对印染废水脱色 | 第48-49页 |
| 3.13 漆酶CueO-p的点突变和序列缺失 | 第49-51页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第51-53页 |
| 4.1 讨论 | 第51-52页 |
| 4.2 展望 | 第52-53页 |
| 第五部分 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
