| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第16-25页 |
| 1.1 嗜盐真菌的简介 | 第16-18页 |
| 1.1.1 极端微生物 | 第16页 |
| 1.1.2 嗜盐真菌与耐盐真菌的定义 | 第16-17页 |
| 1.1.3 嗜盐耐盐真菌的耐盐机制 | 第17页 |
| 1.1.4 嗜盐耐盐真菌研究的意义 | 第17-18页 |
| 1.2 嗜盐耐盐真菌分类研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.1 嗜盐耐盐真菌的主要种群分布 | 第18-19页 |
| 1.2.2 不同分类技术在嗜盐真菌分类中的应用 | 第19-20页 |
| 1.3 木质纤维素及真菌来源纤维素酶简介 | 第20-23页 |
| 1.3.1 纤维素及纤维素酶 | 第20-21页 |
| 1.3.2 外切葡聚糖酶CBH的简介及研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3.3 CBHII的克隆与表达研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 选题背景与研究内容 | 第23-25页 |
| 1.4.1 本文选题背景 | 第23-24页 |
| 1.4.2 本文研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-41页 |
| 2.1 材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 样品及菌株 | 第25页 |
| 2.1.2 主要仪器及试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第25-26页 |
| 2.1.4 主要缓冲液 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-41页 |
| 2.2.1 嗜盐真菌的分离纯化 | 第27页 |
| 2.2.2 嗜盐真菌的形态学观察 | 第27-28页 |
| 2.2.3 嗜盐真菌的盐度耐受性和碳源利用分析 | 第28页 |
| 2.2.4 基因组DNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.5 嗜盐真菌相关基因片段的PCR扩增 | 第28-30页 |
| 2.2.6 测序所得数据处理 | 第30页 |
| 2.2.7 多基因聚类树的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.8 嗜盐真菌外切葡聚糖酶基因cbhⅡ的简并引物设计及保守区扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.9 染色体步移法扩增基因保守区上下游序列 | 第32-33页 |
| 2.2.10 RNA抽提（Trionzl法） | 第33-34页 |
| 2.2.11 反转录获得cDNA | 第34页 |
| 2.2.12 cDNA基因全长的获得 | 第34-35页 |
| 2.2.13 序列比对及部分生物信息学分析 | 第35页 |
| 2.2.14 毕赤酵母表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.2.15 构建含cbhII基因的重组酵母 | 第36页 |
| 2.2.16 具外切葡聚糖酶活性重组子的筛选和鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.17 酵母总DNA的抽提 | 第37页 |
| 2.2.18 重组毕赤酵母的诱导表达 | 第37页 |
| 2.2.19 粗酶液制备及CBHII蛋白纯化 | 第37页 |
| 2.2.20 重组CBHII酶的部分酶学性质研究 | 第37-41页 |
| 2.2.20.1 CBHII酶活测定方法及DNS法测葡萄糖标准曲线 | 第37-39页 |
| 2.2.20.2 溶液中蛋白浓度的测定和BCA蛋白标准曲线的绘制 | 第39-40页 |
| 2.2.20.3 重组CBHII酶的最适pH和最适温度的测定 | 第40页 |
| 2.2.20.4 不同温度或pH处理对重组CBHII酶活力的影响 | 第40-41页 |
| 第三章 结果与分析 | 第41-58页 |
| 3.1 嗜盐真菌的筛选与形态学鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2 菌株的盐度耐受性和碳源利用分析 | 第42-44页 |
| 3.3 Blast分析结果 | 第44页 |
| 3.4 多基因聚类分析 | 第44-45页 |
| 3.5 嗜盐真菌cbhII基因的克隆 | 第45-48页 |
| 3.6 基因序列分析及蛋白三维结构预测 | 第48-51页 |
| 3.7 CBHII的结构预测 | 第51-53页 |
| 3.8 表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.9 pPIC9k-cbhII的转化及重组毕赤酵母菌株筛选 | 第54-55页 |
| 3.10 外切葡聚糖酶的在毕赤酵母中的表达和纯化 | 第55-56页 |
| 3.11 外切纤维素酶的部分酶学性质 | 第56-58页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第58-62页 |
| 4.1 嗜盐真菌MF1的鉴定 | 第58-60页 |
| 4.1.1 嗜盐真菌对盐度环境的适应性 | 第58页 |
| 4.1.2 嗜盐真菌MF1的鉴定 | 第58-60页 |
| 4.2 来源于Phialosimplex halophila –MF1菌株cbhII基因的克隆与表达 | 第60页 |
| 4.3 结论与展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
