| 缩略语表 | 第6-9页 |
| 中文摘要 | 第9-13页 |
| 英文摘要 | 第13-17页 |
| 前言 | 第18-19页 |
| 文献回顾 | 第19-30页 |
| 第一部分 RAN在结直肠癌组织和细胞中的表达 | 第30-42页 |
| 引言 | 第30页 |
| 1 材料 | 第30-32页 |
| 1.1 组织芯片 | 第30页 |
| 1.2 细胞系 | 第30-31页 |
| 1.3 主要实验试剂 | 第31-32页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-35页 |
| 2.1 细胞培养 | 第32-33页 |
| 2.2 免疫组织化学染色 | 第33-34页 |
| 2.3 实时定量荧光PCR | 第34页 |
| 2.4 蛋白免疫印迹技术 | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-40页 |
| 3.1 Ran在结直肠癌原发灶、癌旁和转移灶中的表达 | 第35-37页 |
| 3.2 Ran在HIEC及结直肠癌细胞系中m RNA和蛋白水平的表达 | 第37-39页 |
| 3.3 Ran在9种结直肠癌细胞系中m RNA和蛋白水平的表达 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第二部分 RAN的下调和过表达细胞模型的建立 | 第42-51页 |
| 引言 | 第42页 |
| 1 材料 | 第42-45页 |
| 1.1 siRNA-Ran Oligos | 第42页 |
| 1.2 shRNA慢病毒 | 第42-43页 |
| 1.3 sgRNA慢病毒 | 第43页 |
| 1.4 主要实验试剂 | 第43-44页 |
| 1.5 主要实验仪器 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-47页 |
| 2.1 细胞培养 | 第45页 |
| 2.2 细胞瞬时转染Ran-si RNA Oligos并验证其干扰效率 | 第45-46页 |
| 2.3 Ran-sh RNA慢病毒感染HCT116及DLD-1 细胞系并验证其干扰效率 | 第46页 |
| 2.4 Ran-sg RNA慢病毒感染HT29及SW480细胞系并验证其过表达效率 | 第46-47页 |
| 3 结果 | 第47-50页 |
| 3.1 Ran-si RNA Oligos的筛选及干扰效率的验证 | 第47页 |
| 3.2 Ran-sh RNA慢病毒干扰效率的验证 | 第47-48页 |
| 3.3 Ran-sg RNA慢病毒的筛选和过表达效率的验证 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 第三部分 RAN在结直肠癌细胞增殖和凋亡中的作用 | 第51-58页 |
| 引言 | 第51页 |
| 1 材料 | 第51-52页 |
| 1.1 Ran的下调和过表达细胞模型 | 第51页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第51-52页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第52页 |
| 2 方法 | 第52-53页 |
| 2.1 细胞培养 | 第52页 |
| 2.2 CCK8法检测Ran的干扰和过表达细胞模型中肿瘤细胞的增殖 | 第52页 |
| 2.3 流式细胞技术检测Ran-si RNA Oligos转染后肿瘤细胞的凋亡 | 第52-53页 |
| 2.4 Western blot检测Ran-si RNA Oligos转染后caspase-3 和PARP的表达 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-56页 |
| 3.1 Ran对结肠癌细胞增殖能力的影响 | 第53-54页 |
| 3.2 下调Ran对结肠癌细胞凋亡的影响 | 第54-56页 |
| 3.3 下调Ran对DLD-1 中caspase-3 和PARP的影响 | 第56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第四部分 RAN在结直肠癌细胞迁移和侵袭中的作用 | 第58-65页 |
| 引言 | 第58页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 1.1 Ran的干扰和过表达细胞模型 | 第58页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第58-59页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第59页 |
| 1.4 实验动物 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-61页 |
| 2.1 细胞培养 | 第59页 |
| 2.2 Transwell迁移实验 | 第59-60页 |
| 2.3 Transwell侵袭实验 | 第60页 |
| 2.4 裸鼠尾静脉转移实验 | 第60-61页 |
| 3 结果 | 第61-64页 |
| 3.1 稳定上调或下调Ran后对结肠癌细胞体外迁移和侵袭能力的影响 | 第61-63页 |
| 3.2 稳定下调Ran后对HCT116细胞体内转移能力的影响 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-65页 |
| 第五部分 RAN促进结直肠癌恶性表型发生的机制研究 | 第65-73页 |
| 引言 | 第65页 |
| 1 材料 | 第65-67页 |
| 1.1 Ran的下调和过表达细胞模型 | 第65页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第65-66页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第66-67页 |
| 2 方法 | 第67-68页 |
| 2.1 细胞培养 | 第67页 |
| 2.2 核浆蛋白的提取 | 第67页 |
| 2.3 Western blot检测核浆蛋白和总蛋白中各种分子的表达 | 第67-68页 |
| 2.4 实时定量荧光PCR检测Ran过表达细胞模型中EGFR的表达 | 第68页 |
| 2.5 免疫荧光检测DLD1si RNA中p-EGFR的荧光强度 | 第68页 |
| 3 结果 | 第68-71页 |
| 3.1 HCT116-si Ran核浆蛋白中EGFR、β-catenin、NF-ΚB、p53的表达 | 第68-69页 |
| 3.2 Ran干扰和过表达模型中信号通路分子的表达 | 第69-70页 |
| 3.3 Ran过表达模型中EGFR在m RNA水平的表达 | 第70页 |
| 3.4 DLD1si Ran中p-EGFR的荧光强度 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 小结 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 个人简历和研究成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
