致谢 | 第4-8页 |
摘要 | 第8-9页 |
1 文献综述 | 第9-14页 |
1.1 淀粉合成相关的酶 | 第9页 |
1.2 淀粉合成相关酶的功能 | 第9-10页 |
1.3 植物转录因子研究进展 | 第10-11页 |
1.3.1 转录因子的概念 | 第10页 |
1.3.2 转录因子的分类 | 第10-11页 |
1.3.3 转录因子的功能 | 第11页 |
1.3.4 控制淀粉合成转录因子研究进展 | 第11页 |
1.4 研究问题的提出 | 第11-12页 |
1.5 试验方法的选择 | 第12-13页 |
1.6 本研究的目的与意义 | 第13-14页 |
2 TaRSR1转录因子在小麦籽粒淀粉合成中的功能研究 | 第14-39页 |
2.1 引言 | 第14页 |
2.2 材料与方法 | 第14-26页 |
2.2.1 试验材料 | 第14-15页 |
2.2.1.1 植物材料 | 第14页 |
2.2.1.2 试验所用菌株及质粒载体 | 第14页 |
2.2.1.3 试验所用工具酶、试剂及仪器 | 第14-15页 |
2.2.2 试验方法 | 第15页 |
2.2.2.1 田间种植 | 第15页 |
2.2.2.2 小麦籽粒取样时间与取样方法 | 第15页 |
2.2.3 RNA提取及纯化 | 第15-16页 |
2.2.3.1 小麦籽粒总RNA提取 | 第15-16页 |
2.2.3.2 RNA纯化 | 第16页 |
2.2.3.3 总RNA的质量和纯度检测 | 第16页 |
2.2.4 c DNA第一链合成 | 第16-17页 |
2.2.5 PCR检测cDNA质量 | 第17页 |
2.2.6 5′-RACE | 第17-19页 |
2.2.7 c DNA全长的克隆、鉴定与转化 | 第19-20页 |
2.2.7.1 PCR反应 | 第19页 |
2.2.7.2 电泳检测PCR产物 | 第19页 |
2.2.7.3 PCR产物或DNA片段纯化回收 | 第19页 |
2.2.7.4 目的基因连接与转化 | 第19-20页 |
2.2.7.5 目的基因的测序 | 第20页 |
2.2.8 构建BSMV-TaRSR1重组载体 | 第20-22页 |
2.2.8.1 TaRSR1沉默片段的克隆 | 第20-21页 |
2.2.8.2 BSMV-Ta RSR1重组载体的构建、转化与筛选 | 第21-22页 |
2.2.9 BSMV载体相关质粒提取 | 第22页 |
2.2.10 BSMV质粒载体线性化 | 第22-23页 |
2.2.11 体外转录生产病毒 | 第23-24页 |
2.2.12 小麦材料的准备与接种 | 第24页 |
2.2.12.1 病毒接种混合液的制备 | 第24页 |
2.2.12.2 小麦材料的准备与接种 | 第24页 |
2.2.13 小麦基因组内淀粉合成相关酶基因PCR引物的合成 | 第24-26页 |
2.2.14 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第26页 |
2.2.15 成熟小麦籽粒产量和形态相关参数测定 | 第26页 |
2.3 结果与分析 | 第26-35页 |
2.3.1 TaRSR1目的基因片段的克隆结果分析 | 第26-27页 |
2.3.2 TaRSR1转录因子基因组结构分析 | 第27页 |
2.3.3 TaRSR1转录因子3个拷贝表达量分析 | 第27页 |
2.3.4 TaRSR1转录因子沉默片段的选择 | 第27-29页 |
2.3.5 BSMV-TaRSR1沉默载体的构建 | 第29页 |
2.3.6 BSMV载体线性化结果与分析 | 第29-30页 |
2.3.7 体外转录生产BSMV病毒产物检测 | 第30页 |
2.3.8 BSMV-TaRSR1沉默小麦植株的获得 | 第30-31页 |
2.3.9 沉默植株成熟期籽粒形态及产量相关参数结果分析 | 第31-32页 |
2.3.10 沉默植株小麦籽粒内淀粉合成相关酶基因转录水平分析 | 第32-35页 |
2.4 结论与讨论 | 第35-38页 |
2.4.1 田间条件下运用BSMV-VIGS研究TaRSR1转录因子功能 | 第35-36页 |
2.4.2 沉默TaRSR1转录因子植株成熟期小麦籽粒相关参数的变化 | 第36页 |
2.4.3 沉默TaRSR1转录因子小麦籽粒内淀粉合成相关酶基因的转录水平变化 | 第36页 |
2.4.4 TaRSR1转录因子在籽粒淀粉合成中的调节机制 | 第36-38页 |
2.5 本研究主要结论、创新点及下一步研究计划 | 第38-39页 |
2.5.1 主要结论 | 第38页 |
2.5.2 本研究创新之处 | 第38页 |
2.5.3 下一步拟研究的内容 | 第38-39页 |
攻读硕士学位期间发表文章及获得荣誉情况 | 第39-40页 |
参考文献 | 第40-45页 |
ABSTRACT | 第45-46页 |