致谢 | 第4-7页 |
摘要 | 第7-8页 |
1 文献综述 | 第8-14页 |
1.1 小麦概述 | 第8-9页 |
1.2 淀粉合成 | 第9-13页 |
1.2.1 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 | 第10-12页 |
1.2.2 淀粉合成酶 | 第12-13页 |
1.3 转移肽功能 | 第13-14页 |
2 引言 | 第14-15页 |
3 材料与方法 | 第15-27页 |
3.1 试验材料 | 第15-16页 |
3.1.1 植物材料、菌种及质粒载体 | 第15页 |
3.1.2 工具酶、试剂盒及主要试剂 | 第15-16页 |
3.1.3 试验所用主要仪器 | 第16页 |
3.2 试验方法 | 第16-27页 |
3.2.1 亚细胞定位 | 第16-22页 |
3.2.1.1 总RNA的提取纯化 | 第16-17页 |
3.2.1.2 cDNA第一链合成 | 第17-18页 |
3.2.1.3 目的基因的克隆 | 第18-19页 |
3.2.1.4 PCR产物的回收 | 第19页 |
3.2.1.5 PCR产物与T载体的连接转化 | 第19-20页 |
3.2.1.6 质粒提取 | 第20页 |
3.2.1.7 测序 | 第20页 |
3.2.1.8 瞬时表达重组载体的构建 | 第20-21页 |
3.2.1.9 水稻原生质体的分离与转化 | 第21-22页 |
3.2.1.10 荧光观察 | 第22页 |
3.2.2 过表达重组载体的构建及小麦的遗传转化 | 第22-23页 |
3.2.2.1 总RNA的提取纯化 | 第22页 |
3.2.2.2 cDNA第一链合成 | 第22页 |
3.2.2.3 目的基因的克隆 | 第22-23页 |
3.2.2.4 构建过表达重组载体 | 第23页 |
3.2.2.5 农杆菌侵染的小麦茎尖转化 | 第23页 |
3.2.3 转基因小麦后代的检测筛选 | 第23-24页 |
3.2.3.1 基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
3.2.3.2 转基因小麦的PCR筛选 | 第24页 |
3.2.3.3 转基因小麦的Southern Blot检测 | 第24页 |
3.2.4 转基因小麦转录水平测定 | 第24-26页 |
3.2.4.1 总RNA的提取 | 第25页 |
3.2.4.2 实时荧光定量PCR(qPCR) | 第25-26页 |
3.2.5 转基因小麦AGPase活性测定 | 第26页 |
3.2.6 转基因小麦淀粉含量测定 | 第26页 |
3.2.7 转基因小麦农艺性状参数的测定 | 第26页 |
3.2.8 数据分析处理 | 第26-27页 |
4 结果与分析 | 第27-34页 |
4.1 TaAGPS1b的亚细胞定位 | 第27-30页 |
4.1.1 籽粒总RNA的提取 | 第27-28页 |
4.1.2 TaAGPS1b-EU586278和Ta AGPS1b-FJ643609的克隆 | 第28页 |
4.1.3 瞬时表达重组载体构建结果 | 第28-29页 |
4.1.4 TaAGPS1b-EU586278定位在叶绿体 | 第29-30页 |
4.2 转基因小麦后代的获得 | 第30-33页 |
4.2.1 转基因小麦植株的PCR筛选 | 第30页 |
4.2.2 转基因小麦植株的Southern blot验证 | 第30-31页 |
4.2.3 转基因小麦植株的TaAGPS1b-EU586278的表达水平 | 第31-33页 |
4.3 转基因小麦AGPase活性分析 | 第33页 |
4.4 淀粉含量及农艺性状分析 | 第33-34页 |
5 结论与讨论 | 第34-37页 |
5.1 TaAGPS1b转移肽大片段的缺失不影响其转运功能 | 第34-35页 |
5.2 过表达TaAGPS1b提高小麦籽粒AGPase活性及淀粉含量 | 第35-37页 |
参考文献 | 第37-44页 |
攻读硕士学位期间发表文章及获得荣誉 | 第44-45页 |
Abstract | 第45页 |