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转移肽大片段缺失的质体型AGPase小亚基在小麦淀粉合成中的功能研究

致谢第4-7页
摘要第7-8页
1 文献综述第8-14页
    1.1 小麦概述第8-9页
    1.2 淀粉合成第9-13页
        1.2.1 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶第10-12页
        1.2.2 淀粉合成酶第12-13页
    1.3 转移肽功能第13-14页
2 引言第14-15页
3 材料与方法第15-27页
    3.1 试验材料第15-16页
        3.1.1 植物材料、菌种及质粒载体第15页
        3.1.2 工具酶、试剂盒及主要试剂第15-16页
        3.1.3 试验所用主要仪器第16页
    3.2 试验方法第16-27页
        3.2.1 亚细胞定位第16-22页
            3.2.1.1 总RNA的提取纯化第16-17页
            3.2.1.2 cDNA第一链合成第17-18页
            3.2.1.3 目的基因的克隆第18-19页
            3.2.1.4 PCR产物的回收第19页
            3.2.1.5 PCR产物与T载体的连接转化第19-20页
            3.2.1.6 质粒提取第20页
            3.2.1.7 测序第20页
            3.2.1.8 瞬时表达重组载体的构建第20-21页
            3.2.1.9 水稻原生质体的分离与转化第21-22页
            3.2.1.10 荧光观察第22页
        3.2.2 过表达重组载体的构建及小麦的遗传转化第22-23页
            3.2.2.1 总RNA的提取纯化第22页
            3.2.2.2 cDNA第一链合成第22页
            3.2.2.3 目的基因的克隆第22-23页
            3.2.2.4 构建过表达重组载体第23页
            3.2.2.5 农杆菌侵染的小麦茎尖转化第23页
        3.2.3 转基因小麦后代的检测筛选第23-24页
            3.2.3.1 基因组DNA的提取第23-24页
            3.2.3.2 转基因小麦的PCR筛选第24页
            3.2.3.3 转基因小麦的Southern Blot检测第24页
        3.2.4 转基因小麦转录水平测定第24-26页
            3.2.4.1 总RNA的提取第25页
            3.2.4.2 实时荧光定量PCR(qPCR)第25-26页
        3.2.5 转基因小麦AGPase活性测定第26页
        3.2.6 转基因小麦淀粉含量测定第26页
        3.2.7 转基因小麦农艺性状参数的测定第26页
        3.2.8 数据分析处理第26-27页
4 结果与分析第27-34页
    4.1 TaAGPS1b的亚细胞定位第27-30页
        4.1.1 籽粒总RNA的提取第27-28页
        4.1.2 TaAGPS1b-EU586278和Ta AGPS1b-FJ643609的克隆第28页
        4.1.3 瞬时表达重组载体构建结果第28-29页
        4.1.4 TaAGPS1b-EU586278定位在叶绿体第29-30页
    4.2 转基因小麦后代的获得第30-33页
        4.2.1 转基因小麦植株的PCR筛选第30页
        4.2.2 转基因小麦植株的Southern blot验证第30-31页
        4.2.3 转基因小麦植株的TaAGPS1b-EU586278的表达水平第31-33页
    4.3 转基因小麦AGPase活性分析第33页
    4.4 淀粉含量及农艺性状分析第33-34页
5 结论与讨论第34-37页
    5.1 TaAGPS1b转移肽大片段的缺失不影响其转运功能第34-35页
    5.2 过表达TaAGPS1b提高小麦籽粒AGPase活性及淀粉含量第35-37页
参考文献第37-44页
攻读硕士学位期间发表文章及获得荣誉第44-45页
Abstract第45页

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