| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第13-28页 |
| 1.1 链霉菌简介 | 第13-15页 |
| 1.2 抗生素的生物合成与调控 | 第15-18页 |
| 1.2.1 聚酮抗生素的生物合成 | 第16-17页 |
| 1.2.2 抗生素合成调控的复杂性 | 第17-18页 |
| 1.3 抗生素高产菌育种 | 第18-23页 |
| 1.3.1 传统方法 | 第18-20页 |
| 1.3.2 分子生物学方法 | 第20-23页 |
| 1.4 抗生素美达霉素的生物合成与调控 | 第23-25页 |
| 1.5 美达霉素基因簇中的新型调控基因med-ORF10 | 第25-26页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 1.6.1 利用核糖体再循环因子RRF进行美达霉素高产菌育种 | 第26页 |
| 1.6.2 对调控因子med-ORF10作用机制的研究 | 第26-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-40页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第28-29页 |
| 2.2 培养基 | 第29-31页 |
| 2.3 试剂 | 第31-34页 |
| 2.4 实验方法 | 第34-40页 |
| 第三章 美达霉素高产菌株的遗传改造 | 第40-51页 |
| 3.1 设计简并引物及PCR扩增frr基因 | 第40-42页 |
| 3.2 frr基因的克隆 | 第42-43页 |
| 3.3 扩增产物的序列分析 | 第43-44页 |
| 3.4 构建RRF高表达链霉菌质粒 | 第44-46页 |
| 3.5 RRF高表达质粒在美达霉素产生菌中的超量表达 | 第46-47页 |
| 3.6 RRF的表达促进美达霉素的积累 | 第47-49页 |
| 3.7 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 Med-ORF10可能的靶基因的原核表达及纯化 | 第51-65页 |
| 4.1 设计PCR引物 | 第52-54页 |
| 4.2 各基因的克隆和亚克隆 | 第54-56页 |
| 4.3 各基因的诱导表达 | 第56-59页 |
| 4.3.1 各基因的初步诱导表达 | 第56-57页 |
| 4.3.2 优化目的蛋白诱导表达的条件 | 第57-59页 |
| 4.4 目的蛋白的纯化 | 第59-63页 |
| 4.4.1 Med-ORF30的纯化 | 第59-60页 |
| 4.4.2 Med-ORF29的纯化 | 第60-61页 |
| 4.4.3 Med-ORF28的纯化 | 第61-62页 |
| 4.4.4 Med-ORF27的纯化 | 第62页 |
| 4.4.5 Med-ORF6的纯化 | 第62-63页 |
| 4.5 纯化目的蛋白的Western blot检测 | 第63-64页 |
| 4.6 讨论 | 第64-65页 |
| 第五章 Med-ORF8的表达、纯化及多克隆抗体的制备 | 第65-71页 |
| 5.1 med-ORF8基因的亚克隆 | 第65-66页 |
| 5.2 Med-ORF8的表达及存在形式的检测 | 第66页 |
| 5.3 变性纯化Med-ORF8 | 第66-67页 |
| 5.4 切胶回收Med-ORF8免疫新西兰大白兔 | 第67-68页 |
| 5.5 间接ELISA法检测Med-ORF8多克隆抗体的效价 | 第68-69页 |
| 5.6 用制备的Med-ORF8多克隆抗体检测野生菌链霉菌AM-7161和med-ORF10超表达菌链霉菌AM- 7161/pHSL98内Med-ORF8的表达情况 | 第69-70页 |
| 5.7 讨论 | 第70-71页 |
| 总结与展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
