| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-20页 |
| 1.1 钙信号系统主要组分及功能 | 第10-14页 |
| 1.1.1 钙离子 | 第11页 |
| 1.1.2 钙离子通道蛋白CchA | 第11页 |
| 1.1.3 钙调磷酸酶Calcineurin | 第11-13页 |
| 1.1.4 钙离子结合蛋白CaM | 第13-14页 |
| 1.2 盐逆境 | 第14-15页 |
| 1.3 细胞壁完整性(CWI)信号通路 | 第15-17页 |
| 1.4 模式生物构巢曲霉 | 第17-18页 |
| 1.5 本课题的研究内容、思路及方法 | 第18-20页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第18页 |
| 1.5.2 研究思路 | 第18页 |
| 1.5.3 研究方法 | 第18-20页 |
| 第2章 构巢曲霉cnaB敲除菌株的构建及鉴定 | 第20-28页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-26页 |
| 2.1.1 菌种、质粒及培养条件 | 第21页 |
| 2.1.2 试剂与仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第22-23页 |
| 2.1.4 融合PCR | 第23-24页 |
| 2.1.4.1 扩增全长的各组成片段 | 第23-24页 |
| 2.1.4.2 三片段连接Fusion PCR及产物纯化 | 第24页 |
| 2.1.5 构巢曲霉原生质体的制备及转化 | 第24-25页 |
| 2.1.5.1 原生质体的制备 | 第24页 |
| 2.1.5.2 转化方法 | 第24-25页 |
| 2.1.6 重组子的初步筛选 | 第25页 |
| 2.1.7 转化子的进一步PCR诊断 | 第25-26页 |
| 2.2 实验结果 | 第26-28页 |
| 第3章 构巢曲霉中Calcineurin与CchA在盐逆境下对菌丝极性生长的相互调节作用 | 第28-44页 |
| 3.1 盐逆境下Calcineurin和CchA对菌落及菌丝极性生长的相互调节作用 | 第29-34页 |
| 3.1.1 材料与方法 | 第29-30页 |
| 3.1.1.1 菌种及培养条件 | 第29页 |
| 3.1.1.2 试剂与仪器 | 第29-30页 |
| 3.1.1.3 半固体培养及显微镜菌丝观察 | 第30页 |
| 3.1.2 实验结果 | 第30-34页 |
| 3.1.2.1 盐逆境下Calcineurin和CchA反馈调节菌丝的极性生长 | 第30-33页 |
| 3.1.2.2 低钙环境下Calcineurin敲除菌在应对盐逆境时菌丝生长恢复正常 | 第33-34页 |
| 3.2 盐逆境下CAM在Calcineurin和CchA敲除菌中的定位 | 第34-37页 |
| 3.2.1 材料与方法 | 第35页 |
| 3.2.1.1 菌种及培养条件 | 第35页 |
| 3.2.1.2 试剂与仪器 | 第35页 |
| 3.2.1.3 半固体培养及显微镜菌丝观察 | 第35页 |
| 3.2.2 实验结果 | 第35-37页 |
| 3.3 盐逆境下Calcineurin和CchA敲除菌中相关基因的表达量变化 | 第37-41页 |
| 3.3.1 材料与方法 | 第37-39页 |
| 3.3.1.1 菌种及培养条件 | 第37页 |
| 3.3.1.2 试剂与仪器 | 第37页 |
| 3.3.1.3 RNA的提取 | 第37-38页 |
| 3.3.1.4 反转录PCR | 第38-39页 |
| 3.3.1.5 Real-time qPCR | 第39页 |
| 3.3.2 实验结果 | 第39-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-44页 |
| 3.4.1 盐逆境下Calcineurin和CchA反馈调节菌丝的极性生长 | 第41-42页 |
| 3.4.2 低钙环境可以恢复Calcineurin敲除菌在盐逆境下的菌丝极性生长 | 第42-44页 |
| 第4章 构巢曲霉中Calcineurin与CchA在应对钙毒性时的相互调节作用 | 第44-49页 |
| 4.1 材料与方法 | 第44-45页 |
| 4.1.1 菌种及培养条件 | 第44页 |
| 4.1.2 试剂与仪器 | 第44页 |
| 4.1.3 菌丝液体培养及观察 | 第44-45页 |
| 4.1.4 菌丝球摇瓶培养及定量统计分析 | 第45页 |
| 4.2 实验结果 | 第45-47页 |
| 4.2.1 CchA功能蛋白的缺失可以降低Calcineurin敲除菌株对外钙离子的高度敏感性 | 第45-46页 |
| 4.2.2 钙毒性环境下CchA功能蛋白的缺失可以增加Calcineurin敲除菌株菌丝的生长量 | 第46-47页 |
| 4.3 讨论 | 第47-49页 |
| 第5章 构巢曲霉中Calcineurin与CchA在应对细胞壁胁迫时的相互调节作用 | 第49-52页 |
| 5.1 材料与方法 | 第49-50页 |
| 5.1.1 菌种及培养条件 | 第49页 |
| 5.1.2 试剂与仪器 | 第49-50页 |
| 5.1.3 实验方法 | 第50页 |
| 5.2 实验结果 | 第50-51页 |
| 5.3 讨论 | 第51-52页 |
| 第6章 结论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录A | 第61-63页 |
| 附录B | 第63-64页 |
| 在读期间发表的学术论文与研究成果 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
