| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 热休克蛋白的研究进展 | 第14页 |
| 引言 | 第14-21页 |
| 1 热休克蛋白的发现及研究 | 第14-15页 |
| 2 热休克蛋白的特点 | 第15-16页 |
| 3 热休克蛋白的生物学功能 | 第16-19页 |
| ·分子伴侣的作用 | 第16页 |
| ·HSP 对细胞起保护作用 | 第16-17页 |
| ·抑制细胞凋亡 | 第17页 |
| ·维持细胞内重要遗传物质及蛋白稳定 | 第17-18页 |
| ·磷酸化作用 | 第18页 |
| ·与人类疾病的关系 | 第18-19页 |
| 4 小结 | 第19-21页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第21-23页 |
| 1 研究目的和意义 | 第21页 |
| 2 研究内容 | 第21-22页 |
| 3 实验流程图 | 第22-23页 |
| ·原核表达及分布情况 | 第22页 |
| ·热激实验 | 第22-23页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第23-33页 |
| 1 材料及工具 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-24页 |
| ·Bmhsp21.4 基因的获得 | 第23页 |
| ·Bmhsp21.4 基因的序列分析 | 第23-24页 |
| 3 结果 | 第24-31页 |
| ·Bmhsp21.4 基因的序列 | 第24-25页 |
| ·BmHSP21.4 蛋白的保守域分析 | 第25页 |
| ·BmHSP21.4 蛋白的疏水性分析 | 第25-26页 |
| ·BmHSP21.4 蛋白跨膜区预测 | 第26页 |
| ·BmHSP21.4 蛋白的信号肽分析 | 第26-27页 |
| ·BmHSP21.4 蛋白的功能位点分析 | 第27页 |
| ·BmHSP21.4 蛋白二级结构分析 | 第27-28页 |
| ·BmHSP21.4 蛋白高级结构分析 | 第28页 |
| ·BmHSP21.4 蛋白定位分析 | 第28页 |
| ·BmHSP21.4 同源序列多重比对分析 | 第28-30页 |
| ·BmHSP21.4 进化树的构建 | 第30页 |
| ·电子表达谱分析 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 第四章Bmhsp21.4 基因克隆及原核表达 | 第33-45页 |
| 1 材料与试剂 | 第33-36页 |
| ·材料 | 第33页 |
| ·试剂及仪器 | 第33页 |
| ·试剂的配制 | 第33-36页 |
| 2 方法 | 第36-41页 |
| ·引物的设计 | 第36页 |
| ·质粒提取 | 第36-37页 |
| ·PCR 扩增 | 第37页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第37页 |
| ·双酶切PCR 产物与pET-28a(+) 载体及回收 | 第37-38页 |
| ·连接反应 | 第38页 |
| ·制备感受态细胞 | 第38-39页 |
| ·转化 | 第39页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组质粒转化E.coli BL21(DE3) | 第40页 |
| ·检测重组质粒在大肠杆菌中表达 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-44页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的PCR 扩增及双酶切鉴定 | 第42页 |
| ·测序 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白的诱导表达情况 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 重组蛋白的纯化和多克隆抗体的制备 | 第45-54页 |
| 1 材料与试剂 | 第45-46页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·试剂的配制 | 第45-46页 |
| 2 方法 | 第46-50页 |
| ·His 柱亲和层析纯化重组蛋白 | 第46页 |
| ·纯化重组蛋白透析除盐 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的FPLC 纯化 | 第47页 |
| ·重组蛋白分子量的质谱鉴定 | 第47-48页 |
| ·测蛋白含量 | 第48-49页 |
| ·制备抗原 | 第49页 |
| ·免疫动物 | 第49页 |
| ·多克隆抗血清制备 | 第49-50页 |
| ·间接ELISA 法测定多克隆抗血清效价 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-53页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白分子量的质谱鉴定 | 第51-52页 |
| ·抗体效价测定 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 第六章 BmHSP21.4 蛋白在家蚕中的表达分布 | 第54-64页 |
| 1 材料与试剂 | 第54-55页 |
| ·材料 | 第54页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·试剂的配制 | 第54-55页 |
| 2 方法 | 第55-57页 |
| ·Western blotting 样品的获得 | 第55页 |
| ·Western blotting 检测Bm HSP21.4 蛋白的分布 | 第55-56页 |
| ·总RNA 的提取 | 第56页 |
| ·cDNA 的合成 | 第56页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第56页 |
| ·荧光定量PCR | 第56-57页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第57页 |
| 3 结果 | 第57-62页 |
| ·五龄幼虫各组织中mRNA 量的比较 | 第57-59页 |
| ·家蚕发育过程中mRNA 量的变化 | 第59-61页 |
| ·Western blotting 分析家蚕五龄幼虫各时期中BmHSP21.4 的分布 | 第61页 |
| ·Western blotting 分析家蚕五龄幼虫各组织中BmHSP21.4 的分布 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 第七章 热激实验 | 第64-67页 |
| 1 材料与试剂 | 第64页 |
| ·材料 | 第64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| 2 热激后BmHSP21.4 在5 龄期组织中的表达 | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-67页 |
| 第八章 亚细胞定位 | 第67-71页 |
| 1 材料与试剂 | 第67页 |
| ·材料 | 第67页 |
| ·试剂 | 第67页 |
| 2 方法 | 第67-68页 |
| 3 结果 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
