| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 第一章 文献研究 | 第15-34页 |
| 1 板蓝根中化学成分的研究现状 | 第15-27页 |
| 1.1 多糖类 | 第15页 |
| 1.2 生物碱类 | 第15-19页 |
| 1.2.1 单吲哚类生物碱 | 第15-17页 |
| 1.2.2 二聚吲哚类生物碱 | 第17-18页 |
| 1.2.3 喹琳类生物碱 | 第18页 |
| 1.2.4 喹唑琳类生物碱 | 第18-19页 |
| 1.2.5 异喹啉类生物碱 | 第19页 |
| 1.2.6 其他生物碱 | 第19页 |
| 1.3 苯丙素类 | 第19-21页 |
| 1.3.1 简单苯丙素类 | 第19-20页 |
| 1.3.2 木脂素类 | 第20-21页 |
| 1.3.3 香豆素类 | 第21页 |
| 1.4 有机酸类及其衍生物 | 第21-22页 |
| 1.4.1 芳香酸类及其衍生物 | 第21-22页 |
| 1.4.2 脂肪酸类及其衍生物 | 第22页 |
| 1.5 氨基酸类及多肽 | 第22-23页 |
| 1.6 含硫化合物芥子苷类 | 第23-24页 |
| 1.7 黄酮类 | 第24页 |
| 1.7.1 二氢黄酮类 | 第24页 |
| 1.7.2 异黄酮类 | 第24页 |
| 1.7.3 查而酮类 | 第24页 |
| 1.8 蒽醌类 | 第24-25页 |
| 1.9 甾体类 | 第25-26页 |
| 1.10 三萜类化合物 | 第26-27页 |
| 1.11 核苷类 | 第27页 |
| 1.12 其他化合物 | 第27页 |
| 2 板蓝根抗病毒药理作用的研究现状 | 第27-28页 |
| 2.1 板蓝根注射液和颗粒剂 | 第27页 |
| 2.2 板蓝根多糖提取物 | 第27-28页 |
| 2.3 板蓝根氨基酸、多肽提取物 | 第28页 |
| 2.4 板蓝根苯丙素、生物碱、有机酸提取物 | 第28页 |
| 3 板蓝根抗病毒机制的研究现状 | 第28-30页 |
| 3.1 抑制核蛋白 | 第28页 |
| 3.2 抑制神经氨酸酶 | 第28-29页 |
| 3.3 抑制血凝素 | 第29页 |
| 3.4 抑制胸腺嘧啶脱氧核苷激酶 | 第29页 |
| 3.5 作用于细胞膜表面的唾液酸 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-34页 |
| 第二章 板蓝根血清药物化学研究 | 第34-55页 |
| 第一节 血浆样品的制备方法及检测条件的优化 | 第34-42页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第34-35页 |
| 1.1 实验药材 | 第34页 |
| 1.2 实验试剂 | 第34页 |
| 1.3 实验仪器 | 第34-35页 |
| 1.4 实验动物 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-38页 |
| 2.1 供试品的制备 | 第35-36页 |
| 2.1.1 板蓝根水提液的制备 | 第35页 |
| 2.1.2 空白血浆样品的制备 | 第35页 |
| 2.1.3 含药血浆制备 | 第35页 |
| 2.1.4 最佳取血时间点的选择 | 第35-36页 |
| 2.1.5 含药血浆处理方法的选择 | 第36页 |
| 2.2 色谱条件 | 第36页 |
| 2.3 色谱条件的优化 | 第36-38页 |
| 2.3.1 洗脱系统加酸种类的考察 | 第36-37页 |
| 2.3.2 检测波长的考察 | 第37页 |
| 2.3.3 柱温的考察 | 第37-38页 |
| 2.3.4 流动相的选择 | 第38页 |
| 2.3.5 有机相最高洗脱比例的考察 | 第38页 |
| 3 实验结果 | 第38-41页 |
| 3.1 给药剂量的选择 | 第38页 |
| 3.2 取血时间点的选择 | 第38-39页 |
| 3.3 血浆样品的前处理方法 | 第39-41页 |
| 4 小结与讨论 | 第41-42页 |
| 第二节 板蓝根水提液血浆指纹图谱的建立 | 第42-46页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第42页 |
| 1.1 实验药材 | 第42页 |
| 1.2 实验试剂 | 第42页 |
| 1.3 实验仪器 | 第42页 |
| 1.4 实验动物 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-43页 |
| 2.1 供试品的制备 | 第42页 |
| 2.1.1 板蓝根水提液的制备 | 第42页 |
| 2.1.2 血浆样品的制备 | 第42页 |
| 2.2 色谱条件 | 第42-43页 |
| 2.3 方法学考察 | 第43页 |
| 2.3.1 精密度实验 | 第43页 |
| 2.3.2 稳定性实验 | 第43页 |
| 2.3.3 重现性实验 | 第43页 |
| 2.4 板蓝根水提液血浆指纹图谱的测定 | 第43页 |
| 3 结果 | 第43-45页 |
| 3.1 血浆指纹图谱的建立 | 第43-44页 |
| 3.2 血浆色谱峰的相似度计算 | 第44页 |
| 3.3 含药血浆指纹图谱共有峰标定 | 第44-45页 |
| 4 小结与讨论 | 第45-46页 |
| 第三节 板蓝根血中移行成分的分析 | 第46-55页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第46页 |
| 1.1 实验药材 | 第46页 |
| 1.2 实验试剂 | 第46页 |
| 1.3 实验仪器 | 第46页 |
| 1.4 实验动物 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-47页 |
| 2.1 供试品的制备 | 第46页 |
| 2.1.1 板蓝根水提液的制备 | 第46页 |
| 2.1.2 原药材分析样品的制备 | 第46页 |
| 2.1.3 血浆样品的制备 | 第46页 |
| 2.2 色谱条件 | 第46-47页 |
| 2.3 质谱条件 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-54页 |
| 3.1 水提液化学成分的鉴定 | 第47-49页 |
| 3.2 入血成分的一级质谱蹄查 | 第49-50页 |
| 3.3 入血成分的二级质谱鉴定 | 第50-51页 |
| 3.4 入血成分的标准品比对 | 第51-52页 |
| 3.5 部分入血成分的质谱裂解规律 | 第52-54页 |
| 4 小结与讨论 | 第54-55页 |
| 第三章 板蓝根潜在药效成分直接抗病毒作用研究 | 第55-81页 |
| 第一节 基于分子对接技术的活性筛选 | 第55-61页 |
| 1 方法 | 第55页 |
| 1.1 板蓝根化学成分三维结构和蛋白质的准备 | 第55页 |
| 1.2 分子对接 | 第55页 |
| 2 结果和分析 | 第55-59页 |
| 3 小结与讨论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-61页 |
| 第二节 基于SPR技术的高通量筛选 | 第61-69页 |
| 1 实验材料 | 第61页 |
| 1.1 仪器 | 第61页 |
| 1.2 试剂 | 第61页 |
| 1.3 供试药物 | 第61页 |
| 2 实验方法 | 第61-62页 |
| 2.1 实验测试方法及参数设计 | 第61-62页 |
| 2.2 芯片制作参数 | 第62页 |
| 2.3 检测步骤 | 第62页 |
| 3 实验结果 | 第62-67页 |
| 3.1 阴阳性对照信号图 | 第62-63页 |
| 3.2 所有结合点与NA、HA蛋白的相互作用 | 第63-64页 |
| 3.2.1 流动相NA与芯片上所有结合点的结合情况 | 第63页 |
| 3.2.2 流动相HA与芯片上所有结合点的结合情况 | 第63-64页 |
| 3.3 不同小分子配体与NA、HA蛋白浓度梯度结合曲线 | 第64-65页 |
| 3.3.1 小分子甘草素与NA浓度梯度特异性结合曲线 | 第64页 |
| 3.3.2 小分子3-醛基吲哚与NA浓度梯度特异性结合曲线 | 第64-65页 |
| 3.3.3 小分子靛蓝与HA浓度梯度特异性结合曲线 | 第65页 |
| 3.4 小分子配体与NA、HA蛋白结合的动力学及亲和力参数 | 第65-66页 |
| 3.5 数据分析 | 第66-67页 |
| 4 小结与讨论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-69页 |
| 第三节 潜在药效成分抑制流感病毒神经氨酸酶的活性验证 | 第69-76页 |
| 1 实验材料 | 第69页 |
| 1.1 主要仪器及设备 | 第69页 |
| 1.2 主要试剂与药品 | 第69页 |
| 1.3 受试药物 | 第69页 |
| 2 实验方法 | 第69-74页 |
| 2.1 阳性对照溶液的制备 | 第69-70页 |
| 2.2 供试品溶液的制备 | 第70页 |
| 2.3 各种缓冲液的配制 | 第70页 |
| 2.4 检测条件的优化 | 第70-73页 |
| 2.4.1 孵育时间对检测流感病毒神经氨酸酶的影响 | 第70-71页 |
| 2.4.2 荧光底物浓度对检测流感病毒神经氨酸酶的影响 | 第71-72页 |
| 2.4.3 温度对检测流感病毒神经氨酸酶的影响 | 第72-73页 |
| 2.4.4 检测体系pH值 | 第73页 |
| 2.5 神经氨酸酶抑制剂检测步骤 | 第73-74页 |
| 2.6 数据处理 | 第74页 |
| 3 实验结果 | 第74-75页 |
| 4 讨论与小结 | 第75-76页 |
| 第四节 板蓝根潜在药效成分抗血凝素活性研究 | 第76-81页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第76页 |
| 1.1 实验试剂 | 第76页 |
| 1.2 实验仪器 | 第76页 |
| 1.3 鸡红细胞及流感病毒血凝素 | 第76页 |
| 1.4 受试药物 | 第76页 |
| 2 实验方法 | 第76-77页 |
| 2.1 试剂的配制 | 第76页 |
| 2.1.1 Alsever氏液的配制 | 第76页 |
| 2.1.2 PBS缓冲液的配制 | 第76页 |
| 2.2 供试品的配制 | 第76页 |
| 2.3 红细胞悬液的制备 | 第76-77页 |
| 2.4 HA滴度的测定 | 第77页 |
| 2.5 检测条件的优化 | 第77页 |
| 2.5.1 孵育时间对检测的影响 | 第77页 |
| 2.5.2 温度对检测的影响 | 第77页 |
| 2.6 实验结果判断 | 第77页 |
| 3 实验结果 | 第77-78页 |
| 3.1 不同反应时间对实验的影响 | 第77-78页 |
| 3.2 不同温度对红细胞凝集的影响 | 第78页 |
| 3.3 红细胞凝集实验结果 | 第78页 |
| 4 小结与讨论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-81页 |
| 第四章 板蓝根潜在药效成分对RIG-Ⅰ和TLR3介导的天然免疫信号通路调控作用的研究 | 第81-102页 |
| 第一节 板蓝根含药血浆对RIG-Ⅰ和TLR3介导的天然免疫信号通路调控作用的研究 | 第81-97页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第81-83页 |
| 1.1 受试药物 | 第81页 |
| 1.2 实验试剂 | 第81-82页 |
| 1.3 实验仪器 | 第82-83页 |
| 1.4 实验动物 | 第83页 |
| 1.5 细胞与病毒 | 第83页 |
| 2 实验方法 | 第83-87页 |
| 2.1 含药血浆的制备 | 第83页 |
| 2.2 含药血浆的前处理 | 第83页 |
| 2.3 细胞培养方法 | 第83页 |
| 2.3.1 人喉癌上皮细胞(Hep-2) | 第83页 |
| 2.3.2 小鼠单核巨噬细胞(Raw264.7) | 第83页 |
| 2.4 RSV的扩增和病毒液病毒滴度的测定 | 第83-84页 |
| 2.4.1 RSV的扩增 | 第83-84页 |
| 2.4.2 RSV病毒液病毒滴度的测定 | 第84页 |
| 2.5 RSV感染模型的制备 | 第84页 |
| 2.6 模拟病毒感染模型的制备 | 第84-85页 |
| 2.7 实验分组与药物干预 | 第85页 |
| 2.7.1 实验分组方法 | 第85页 |
| 2.7.2 药物干预方案 | 第85页 |
| 2.7.3 细胞样本的采集 | 第85页 |
| 2.8 MTT法测定药物最大无毒浓度 | 第85页 |
| 2.9 实时荧光定量PCR法 | 第85-86页 |
| 2.9.1 总RNA的提取方法 | 第85页 |
| 2.9.2 RNA浓度及纯度的测定 | 第85-86页 |
| 2.9.3 RNA反转录 | 第86页 |
| 2.9.4 实时荧光定量 | 第86页 |
| 2.10 Western blot实验 | 第86-87页 |
| 2.10.1 总蛋白的提取 | 第86页 |
| 2.10.2 蛋白含量的测定(BCA法) | 第86页 |
| 2.10.3 蛋白质电泳 | 第86-87页 |
| 2.11 ELISA法测IFN-β含量 | 第87页 |
| 2.12 数据的处理 | 第87页 |
| 3 实验结果 | 第87-92页 |
| 3.1 RSV感染的RAW264.7细胞中病毒载量及IFN-β表达特征 | 第87-89页 |
| 3.2 药物对正常RAW264.7细胞的影响 | 第89页 |
| 3.3 板蓝根含药血浆调节病毒感染RAW264.7细胞中IFN-β的表达 | 第89-90页 |
| 3.4 板蓝根含药血浆对RIG-Ⅰ和TLR3信号通路的调节 | 第90-91页 |
| 3.5 板蓝根含药血浆对poly (I:C)模拟病毒感染模型的影响 | 第91-92页 |
| 4 小结与讨论 | 第92-96页 |
| 4.1 空白血浆对细胞的影响 | 第92-93页 |
| 4.2 剂量组的设置 | 第93页 |
| 4.3 板蓝根对IFN-β的调节 | 第93页 |
| 4.4 板蓝根对RIG-Ⅰ的调节 | 第93页 |
| 4.5 板蓝根对TLR3的调节 | 第93-94页 |
| 4.6 潜在药效成分协同作用的初步阐释 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-97页 |
| 第二节 板蓝根入血单体成分对RIG-Ⅰ和TLR3介导的天然免疫信号通路调控作用的研究 | 第97-102页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第97页 |
| 1.1 受试药物 | 第97页 |
| 1.2 实验试剂 | 第97页 |
| 1.3 实验仪器 | 第97页 |
| 1.4 细胞与病毒 | 第97页 |
| 2 实验方法 | 第97-98页 |
| 2.1 供试品药物的配制 | 第97页 |
| 2.2 细胞培养方法 | 第97页 |
| 2.3 RSV的扩增和病毒液病毒滴度的测定 | 第97页 |
| 2.4 RSV感染模型的制备 | 第97页 |
| 2.5 模拟病毒感染模型的制备 | 第97页 |
| 2.6 实验分组与药物干预 | 第97-98页 |
| 2.6.1 实验分组方法 | 第97页 |
| 2.6.2 药物干预方案 | 第97页 |
| 2.6.3 细胞样本的采集 | 第97-98页 |
| 2.7 MTT法测定药物最大无毒浓度 | 第98页 |
| 2.8 实时荧光定量PCR法 | 第98页 |
| 2.9 Western blot实验 | 第98页 |
| 2.10 ELISA法测IFN-β含量 | 第98页 |
| 3 实验结果 | 第98-101页 |
| 3.1 药物对正常RAW264.7细胞的影响 | 第98-99页 |
| 3.2 板蓝根入血单体成分调节病毒感染RAW264.7细胞中IFN-β的表达 | 第99-100页 |
| 3.3 4(3H)喹唑酮对RIG-Ⅰ信号通路的调节 | 第100-101页 |
| 3.4 4(3H)喹唑酮对TLR3信号通路的调节 | 第101页 |
| 4 小节与讨论 | 第101-102页 |
| 结论 | 第102-104页 |
| 附录 | 第104-106页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
