| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 课题来源 | 第11页 |
| 1.2 课题研究目的及意义 | 第11-12页 |
| 1.3 DNA片段的体外拼接技术 | 第12-16页 |
| 1.3.1 DNA片段体外拼接技术研究进展 | 第12页 |
| 1.3.2 DNA体外拼接技术 | 第12-16页 |
| 1.4 PCR添加剂的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.4.1 纳米材料作为PCR添加剂的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.4.2 核内小分子作为PCR添加剂的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4.3 PCR添加剂增效机理的研究方法 | 第19-21页 |
| 1.5 课题研究内容 | 第21-23页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第23-42页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第23-24页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.2.2 主要实验仪器设备 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-30页 |
| 2.3.1 接头引物的设计 | 第24-27页 |
| 2.3.2 含有overlaps的短DNA片段的获得 | 第27-28页 |
| 2.3.3 感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.3.4 质粒pCC1 BAC的转化和提取 | 第28-29页 |
| 2.3.5 Gibson Assembly | 第29-30页 |
| 2.3.6 重叠延伸PCR | 第30页 |
| 2.3.7 PCR产物的检测 | 第30页 |
| 2.4 溶液的配制 | 第30-32页 |
| 2.4.1 2×Gibson Assembly Master Mix的配置 | 第30-31页 |
| 2.4.2 引物的配制 | 第31页 |
| 2.4.3 核内小分子溶液的配置 | 第31页 |
| 2.4.4 纳米材料溶液的配置 | 第31-32页 |
| 2.4.5 氯霉素的配置 | 第32页 |
| 2.4.6 LB培养基的配置 | 第32页 |
| 2.5 Gibson Assembly—分子克隆实验模型的建立 | 第32-38页 |
| 2.5.1 接头引物信息 | 第32-33页 |
| 2.5.2 含有overlaps的DNA片段的PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.5.3 短DNA片段的Gibson Assembly | 第34-35页 |
| 2.5.4 DNA克隆系统的选择 | 第35页 |
| 2.5.5 转化、筛选获得高拷贝量的环状质粒 | 第35-36页 |
| 2.5.6 线性化质粒的酶切获得 | 第36页 |
| 2.5.7 短DNA片段与线性化pCC1 质粒的Gibson Assembly | 第36-37页 |
| 2.5.8 重组质粒的转化、涂布、筛选、鉴定 | 第37-38页 |
| 2.6 PCR增效剂—重叠延伸PCR实验模型的建立 | 第38-41页 |
| 2.6.1 最佳PCR buffer的测定 | 第38-39页 |
| 2.6.2 最佳循环条件的测定 | 第39页 |
| 2.6.3 小分子和纳米材料最适浓度的测定 | 第39-41页 |
| 2.7 本章总结 | 第41-42页 |
| 第3章 核内小分子对GibsonAssembly增效作用研究 | 第42-50页 |
| 3.1 引言 | 第42-43页 |
| 3.2 七种核内小分子——Gibson Assembly的初步筛选 | 第43-47页 |
| 3.2.1 含有overlaps的短DNA片段的获得 | 第43-44页 |
| 3.2.2 短片段的Gibson Assembly | 第44页 |
| 3.2.3 重组质粒的转化、涂布及检测 | 第44-47页 |
| 3.3 七种核内小分子——Gibson Assembly的复筛 | 第47-49页 |
| 3.4 本章小结 | 第49-50页 |
| 第4章 核内小分子和纳米材料对重叠延伸PCR增效作用研究 | 第50-60页 |
| 4.1 引言 | 第50-52页 |
| 4.2 核内小分子对重叠延伸PCR增效作用的研究 | 第52-55页 |
| 4.2.1 增效核内小分子的初步筛选 | 第52-53页 |
| 4.2.2 增效核内小分子的复筛 | 第53-54页 |
| 4.2.3 增效核内小分子的最终筛选 | 第54-55页 |
| 4.3 纳米材料对重叠延伸PCR增效作用的研究 | 第55-58页 |
| 4.3.1 纳米材料的初步筛选 | 第55-56页 |
| 4.3.2 增效纳米材料的复筛 | 第56-57页 |
| 4.3.3 增效纳米材料的最终筛选 | 第57-58页 |
| 4.4 本章小结 | 第58-60页 |
| 第5章 核内小分子和纳米材料可能增效机制的初步研究 | 第60-66页 |
| 5.1 引言 | 第60页 |
| 5.2 增效小分子对Q-PCR扩增融解曲线的影响 | 第60-64页 |
| 5.3 本章小结 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
