| 中英文缩写表 | 第3-5页 |
| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一部分 化疗药物诱导癌干细胞的产生 | 第15-62页 |
| 第一章 前言和介绍 | 第15-29页 |
| 1.1 癌干细胞标志分子与SIDE POPULATION | 第16-22页 |
| 1.1.1 标志分子 | 第16-18页 |
| 1.1.2 ABC基因家族与Side population | 第18-21页 |
| 1.1.3 SP细胞与癌症干细胞 | 第21-22页 |
| 1.2 干细胞有关的多能性调控基因 | 第22-26页 |
| 1.3 癌细胞无血清悬浮培养与癌干细胞 | 第26-28页 |
| 1.4 简要技术流程 | 第28-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-47页 |
| 2.1 细胞的解冻，培养与传代 | 第29页 |
| 2.2 卡铂药物毒性分析 | 第29-32页 |
| 2.2.1 MTT 分析 | 第29-31页 |
| 2.2.2 台盼蓝活细胞计数 | 第31-32页 |
| 2.3 化疗药物对癌细胞进行处理及癌细胞球形成分析 | 第32-33页 |
| 2.3.1 无血清干细胞培养液的配制 | 第32-33页 |
| 2.3.2 化疗药物处理及成球分析 | 第33页 |
| 2.4 多能性基因表达的RNA水平分析 | 第33-37页 |
| 2.4.1 总RNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.4.2 cDNA的合成 | 第34-35页 |
| 2.4.3 实时定量PCR(real-time PCR) | 第35-37页 |
| 2.5 多能性基因表达的蛋白质水平检测 | 第37-43页 |
| 2.5.1 细胞总蛋白质的提取 | 第37页 |
| 2.5.2 蛋白质BCA法定量分析 | 第37-39页 |
| 2.5.3 蛋白质免疫印迹Western Blotting | 第39-43页 |
| 2.6 HOECHST 33342染色与流式细胞分选 | 第43-44页 |
| 2.6.1 Hoechst 33342染色 | 第43-44页 |
| 2.6.2 流式细胞仪的参数设置 | 第44页 |
| 2.7 RNA干扰 | 第44-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-58页 |
| 3.1 低浓度与短时间化疗药物处理对有限杀伤肝癌细胞 | 第47-49页 |
| 3.2 低浓度卡铂刺激HEPG2和HUH7悬浮成球能力上升 | 第49页 |
| 3.3 低浓度卡铂药物处理后,多能性基因Sox2 AND OCT3/4显著上调 | 第49-53页 |
| 3.4 低浓度化疗药物诱导非癌干细成球能力上升 | 第53-55页 |
| 3.5 Sox2和OCT3/4干扰后影响细胞的成球能力 | 第55页 |
| 3.6 Sox2和OCT3/4干扰后降低肝癌细胞抗药性 | 第55-58页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第58-62页 |
| 第二部分 癌干细胞小鼠模型的鉴定 | 第62-88页 |
| 第一章 前言和介绍 | 第62-70页 |
| 1.1 结肠癌及其分子机理 | 第62-63页 |
| 1.2 APC基因与WNT信号通路 | 第63-68页 |
| 1.3 结肠癌小鼠模型 | 第68-70页 |
| 第二章 材料与方法 | 第70-76页 |
| 2.1 APCmin+小鼠品系的繁殖维持和基因型鉴定 | 第70-71页 |
| 2.2 APCmin+小鼠肠道肿瘤活细胞的分离 | 第71-72页 |
| 2.3 APCmin+小鼠肠道肿瘤组织的蛋白提取和Westenr检测 | 第72-73页 |
| 2.4 APCmin+小鼠全小肠swiss卷切片与免疫组织化学检测 | 第73-76页 |
| 2.4.1 小鼠全小肠切片 | 第73页 |
| 2.4.2 免疫组化染色 | 第73-76页 |
| 第三章 结果与分析 | 第76-81页 |
| 3.1 APCmin+小鼠小肠中肿瘤的发生 | 第76-78页 |
| 3.2 APCMIN+小鼠肠癌中癌干细胞随着肿瘤的发生和恶化而增多 | 第78页 |
| 3.3 APCMIN+小鼠肠癌中癌干细胞随着肿瘤的发生和恶化干细胞基因逐渐激活 | 第78-79页 |
| 3.4 免疫组化检测小鼠肿瘤标本中多能性相关基因的表达 | 第79-81页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第81-88页 |
| 参考文献 | 第88-101页 |
| 致谢 | 第101-103页 |
| 附录 | 第103-105页 |
