| 中英文縮写表 | 第3-5页 |
| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 第一部分 调控特定基因的miRNAs的筛选方法建立 | 第16-60页 |
| 第一章 前言 | 第16-28页 |
| 1.1 miRNA概述 | 第16-17页 |
| 1.2 miRNA的产生及作用原理 | 第17-20页 |
| 1.3 miRNA的功能 | 第20-25页 |
| 1.3.1 miRNA与疾病 | 第21-23页 |
| 1.3.2 miRNA与生长发育 | 第23-24页 |
| 1.3.3 miRNA与免疫的关系 | 第24页 |
| 1.3.4 miRNA与生殖的关系 | 第24-25页 |
| 1.4 本课题研究背景和意义 | 第25-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-43页 |
| 2.1 仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第29-33页 |
| 2.2.1 试剂盒 | 第29页 |
| 2.2.2 质粒载体和工具酶 | 第29-30页 |
| 2.2.3 其它试剂 | 第30页 |
| 2.2.4 菌种和细胞株 | 第30页 |
| 2.2.5 所需溶液 | 第30-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-43页 |
| 2.3.1 人PDCD4基因和β-ACTIN基因3'UTR的克隆及EGFP荧光接头载体的构建 | 第33-35页 |
| 2.3.2 生物信息学预测EGFP mRNA二级结构并设计EGFP的反义链DNA | 第35-36页 |
| 2.3.3 HeLa细胞培养及转染 | 第36-38页 |
| 2.3.4 细胞荧光定位 | 第38-39页 |
| 2.3.5 Western Blot实验 | 第39-40页 |
| 2.3.6 Streptavidin-Biotin Pull-Down实验 | 第40-41页 |
| 2.3.7 RNA的提取与PCR检测 | 第41-43页 |
| 第三章 实验结果 | 第43-55页 |
| 3.1 pEGFP-C1-PDCD4 3'UTR和PEGFP-C1-β-ACTIN 3'UTR重组质粒构建成功 | 第43-45页 |
| 3.2 Biotin标记EGFP mRNA反义链DNA成功并能稳定存在 | 第45-51页 |
| 3.2.1 EGFP mRNA二级结构的预测结果 | 第45-46页 |
| 3.2.2 EGFP mRNA反义链Biotin标记的检测 | 第46-51页 |
| 3.3 Streptavidin-Biotin Pull-Down产物中检测到EGFP-PDCD4 3'UTR和EGFP-β-ACTIN 3'UTRmRNA的存在 | 第51-54页 |
| 3.4 PCR检测miR-21能够结合EGFP-PDCD4 3'UTR mRNA | 第54-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-60页 |
| 第二部分 非编码RNA基因Z38的鉴定和功能研究 | 第60-91页 |
| 第一章 前言 | 第60-72页 |
| 1.1 ncRNA的研究概况 | 第60-61页 |
| 1.2 ncRNA的概念 | 第61页 |
| 1.3 ncRNA的种类 | 第61-62页 |
| 1.4 ncRNA的功能 | 第62-67页 |
| 1.4.1 ncRNA对染色体结构和转录的影响 | 第63页 |
| 1.4.2 ncRNA在RNA加工和修饰中发挥作用 | 第63-65页 |
| 1.4.3 ncRNA对mRNA的稳定性与翻译影响 | 第65-66页 |
| 1.4.4 ncRNA影响蛋白质的稳定性和转运 | 第66-67页 |
| 1.5 非编码基因Z38研究背景 | 第67-72页 |
| 第二章 材料与方法 | 第72-79页 |
| 2.1 仪器 | 第72页 |
| 2.2 材料与试剂 | 第72-73页 |
| 2.2.1 试剂盒与试剂 | 第72页 |
| 2.2.2 质粒载体和工具酶 | 第72页 |
| 2.2.3 实验动物与组织 | 第72-73页 |
| 2.2.4 菌种与细胞 | 第73页 |
| 2.2.5 所需溶液 | 第73页 |
| 2.3 实验方法 | 第73-79页 |
| 2.3.1 Z38基因开放阅读框体外翻译实验 | 第73-75页 |
| 2.3.2 EGFP-Z38重组质粒荧光显微镜检测 | 第75-76页 |
| 2.3.3 Z38在人癌组织和癌细胞系中的表达谱分析 | 第76-77页 |
| 2.3.4 针对Z38的RNA干扰 | 第77页 |
| 2.3.5 Z38 siRNAs处理成瘤裸鼠实验 | 第77-79页 |
| 第三章 实验结果 | 第79-86页 |
| 3.1 Z38基因是非编码基因 | 第79-82页 |
| 3.2 Z38基因表达谱分析 | 第82-83页 |
| 3.3 Z38 siRNAS可以干扰Z38基因 | 第83-84页 |
| 3.4 Z38 siRNAs可以抑制乳腺癌细胞系成瘤裸鼠肿瘤生长 | 第84-86页 |
| 第四章 讨论 | 第86-91页 |
| 参考文献 | 第91-106页 |
| 附录 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
