海南省菠萝主要病原真菌鉴定及病原病毒多重RT-PCR检测体系的建立
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| 1 前言 | 第13-25页 |
| ·菠萝的生物学特性 | 第13页 |
| ·菠萝的价值 | 第13-15页 |
| ·营养价值 | 第13-14页 |
| ·医用价值 | 第14页 |
| ·其他价值 | 第14-15页 |
| ·菠萝产业现状及影响因素 | 第15-17页 |
| ·发展现状 | 第15-16页 |
| ·影响我国菠萝产业发展的因素 | 第16-17页 |
| ·菠萝真菌病害研究进展 | 第17-19页 |
| ·叶斑病 | 第17页 |
| ·心腐病 | 第17-18页 |
| ·果腐病 | 第18页 |
| ·生物学特性研究在真菌鉴定中的应用 | 第18页 |
| ·分子生物学在真菌鉴定中的应用 | 第18-19页 |
| ·发展简史与现状 | 第18-19页 |
| ·rDNA-ITS序列分析在真菌鉴定中的应用 | 第19页 |
| ·菠萝病毒病及其病原检测技术研究进展 | 第19-24页 |
| ·凋萎病 | 第19-21页 |
| ·杆状病毒病 | 第21页 |
| ·黄点病 | 第21-22页 |
| ·褪绿条纹病 | 第22页 |
| ·菠萝病毒检测技术 | 第22-24页 |
| ·电镜检测(EM)与免疫电镜检测(ISEM) | 第22-23页 |
| ·间接酶联免疫吸附(ELISA)检测 | 第23页 |
| ·组织印迹免疫法(TBIA) | 第23页 |
| ·核酸分析检测 | 第23页 |
| ·反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测 | 第23-24页 |
| ·多重RT-PCR技术及其在植物病毒检测中的应用 | 第24页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·试验材料 | 第25-26页 |
| ·供试植物样本材料 | 第25页 |
| ·供试菌株 | 第25页 |
| ·生物学特性研究供试菌株 | 第25页 |
| ·分子生物学实验供试菌株及病毒材料 | 第25页 |
| ·供试培养基 | 第25-26页 |
| ·供试试剂及试剂盒等材料 | 第26页 |
| ·主要溶液配制方法 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-37页 |
| ·病害调查与病原鉴定 | 第26-27页 |
| ·病害种类的确定 | 第26-27页 |
| ·病情调查 | 第27页 |
| ·病害样本采集 | 第27页 |
| ·真菌病原的分离、纯化与形态学鉴定 | 第27-29页 |
| ·真菌病原的分离 | 第27页 |
| ·真菌病原的纯化 | 第27-28页 |
| ·真菌病原的致病性测定 | 第28页 |
| ·真菌病原的保存与形态学鉴定 | 第28-29页 |
| ·真菌病原的生物学特性研究 | 第29-30页 |
| ·温度对菌丝生长及分生孢子萌发的影响 | 第29页 |
| ·pH对菌丝生长及分生孢子萌发的影响 | 第29页 |
| ·碳源对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第29页 |
| ·氮源对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第29-30页 |
| ·光照条件对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第30页 |
| ·湿度对孢子萌发的影响 | 第30页 |
| ·致死温度和时间的测定 | 第30页 |
| ·数据处理 | 第30页 |
| ·真菌病原的分子鉴定 | 第30-32页 |
| ·菌体材料的获取 | 第30页 |
| ·病原菌基因组DNA的提取 | 第30页 |
| ·病原菌基因组rDNA-ITS序列扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR产物回收 | 第31页 |
| ·连接 | 第31页 |
| ·转化 | 第31页 |
| ·抗生素筛选阳性克隆 | 第31-32页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第32页 |
| ·测序与分析 | 第32页 |
| ·病毒病原的分子检测 | 第32-37页 |
| ·样本采集与保存 | 第32页 |
| ·样本总RNA的提取 | 第32-33页 |
| ·1st-strand cDNA的合成 | 第33页 |
| ·引物准备 | 第33-34页 |
| ·反应体系及程序设置 | 第34-36页 |
| ·病毒RT-PCR检测反应体系及程序设置 | 第34页 |
| ·病毒多重RT-PCR检测反应体系及程序设置 | 第34-36页 |
| ·引物特异性检测 | 第35页 |
| ·单重PCR反应退火温度试验 | 第35页 |
| ·多重PCR反应体系与程序设置 | 第35-36页 |
| ·连接、转化、测序与分析 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-68页 |
| ·病害调查与真菌病原形态学鉴定结果 | 第37-46页 |
| ·炭疽病 | 第37-38页 |
| ·链格孢烂果病 | 第38-40页 |
| ·心腐病 | 第40页 |
| ·弯孢霉黑斑病 | 第40-41页 |
| ·刺环裂壳孢叶斑病 | 第41-43页 |
| ·拟盘多毛孢红斑病 | 第43-44页 |
| ·凸脐蠕孢灰斑病 | 第44-45页 |
| ·毛壳菌轮斑病 | 第45-46页 |
| ·真菌病原生物学特性研究 | 第46-55页 |
| ·菠萝炭疽病病原菌生物学特性研究 | 第46-49页 |
| ·温度对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第46-47页 |
| ·pH对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第47页 |
| ·碳源对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第47页 |
| ·氮源源对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第47页 |
| ·光照条件对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第47-48页 |
| ·湿度对孢子萌发的影响 | 第48页 |
| ·致死温度和时间的测定 | 第48-49页 |
| ·菠萝烂果病病原菌生物学特性研究 | 第49-52页 |
| ·温度对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第49页 |
| ·pH对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第49-50页 |
| ·碳源对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第50页 |
| ·氮源源对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第50-51页 |
| ·光照条件对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第51页 |
| ·湿度对孢子萌发的影响 | 第51页 |
| ·致死温度和时间的测定 | 第51-52页 |
| ·菠萝灰斑病病原菌生物学特性研究 | 第52-55页 |
| ·温度对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第52-53页 |
| ·pH对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第53页 |
| ·碳源对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第53-54页 |
| ·氮源源对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第54页 |
| ·光照条件对菌丝生长和孢子萌发的影响 | 第54页 |
| ·湿度对孢子萌发的影响 | 第54页 |
| ·致死温度和时间的测定 | 第54-55页 |
| ·分子生物学方法鉴定真菌病原 | 第55-57页 |
| ·病原菌基因组DNA的提取 | 第55页 |
| ·病原菌基因组rDNA-ITS序列扩增 | 第55页 |
| ·菌液PCR检测结果 | 第55-56页 |
| ·目的片段测序结果分析 | 第56-57页 |
| ·病毒病害的分子检测 | 第57-62页 |
| ·样本总RNA的提取 | 第57-58页 |
| ·RT-CR检测病毒种类 | 第58-59页 |
| ·目的片段测序结果分析 | 第59-62页 |
| ·病毒的多重RT-PCR检测 | 第62-68页 |
| ·多重RT-PCR引物特异性检测与目的序列分析 | 第62-64页 |
| ·单重RT-PCR反应退火温度梯度试验结果分析 | 第64-65页 |
| ·多重RT-PCR体系反应因子梯度试验结果分析 | 第65-67页 |
| ·退火温度梯度试验结果分析 | 第65页 |
| ·dNTPs梯度试验结果分析 | 第65-66页 |
| ·Taq酶梯度试验结果分析 | 第66页 |
| ·延伸时间梯度试验结果分析 | 第66页 |
| ·PCR循环次数梯度试验结果分析 | 第66-67页 |
| ·多重RT-PCR体系灵敏度试验结果分析 | 第67-68页 |
| 4 结论与讨论 | 第68-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附录A | 第81-82页 |
| 附录B | 第82-84页 |
| 附录C | 第84-87页 |
