紫花苜蓿热激蛋白基因MsHSP70的克隆及功能分析
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文略缩表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| 1.1 苜蓿转抗逆基因研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.1 转抗旱基因 | 第14-15页 |
| 1.1.2 转耐盐碱基因 | 第15页 |
| 1.1.3 转抗寒基因 | 第15-16页 |
| 1.1.4 转耐重金属基因 | 第16页 |
| 1.2 植物热激蛋白研究进展 | 第16-21页 |
| 1.2.1 热激蛋白的类型及分布特点 | 第17-18页 |
| 1.2.2 热激蛋白不同家族的特征及作用 | 第18-20页 |
| 1.2.3 热激蛋白的功能 | 第20页 |
| 1.2.4 热激蛋白基因的调控机制 | 第20-21页 |
| 1.2.5 植物热激蛋白应用展望 | 第21页 |
| 1.3 本研究目的意义 | 第21-22页 |
| 第二章 基因的克隆及序列分析 | 第22-30页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 cDNA第一链的合成 | 第23页 |
| 2.2.3 MsHSP70基因的克隆 | 第23-24页 |
| 2.2.4 PCR产物的回收 | 第24页 |
| 2.2.5 连接克隆载体及转化 | 第24-25页 |
| 2.2.6 序列的生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.3 结果分析 | 第25-29页 |
| 2.3.1 紫花苜蓿RNA的检测 | 第25-26页 |
| 2.3.2 目的基因的克隆 | 第26页 |
| 2.3.3 生物信息学分析 | 第26-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 亚细胞定位与原核表达分析 | 第30-36页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第30页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第30页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 3.2.1 超表达载体的构建 | 第30页 |
| 3.2.2 基因枪子弹的制作 | 第30-31页 |
| 3.2.3 基因枪轰击洋葱表皮及检测 | 第31页 |
| 3.2.4 MsHSP70基因原核表达载体的构建 | 第31页 |
| 3.3 MsHSP70蛋白SDS-PAGE电泳 | 第31-33页 |
| 3.3.1 总蛋白的提取 | 第31-32页 |
| 3.3.2 SDS-PAGE电泳分析 | 第32-33页 |
| 3.4 结果分析 | 第33-34页 |
| 3.4.1 亚细胞定位分析 | 第33-34页 |
| 3.4.2 原核表达结果分析 | 第34页 |
| 3.5 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 MsHSP70基因在苜蓿中的表达分析 | 第36-42页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第36页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第36页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第36页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第36页 |
| 4.2 实验方法 | 第36-37页 |
| 4.2.1 中苜1号苜蓿的培养 | 第36页 |
| 4.2.2 RNA的提取及反转录 | 第36页 |
| 4.2.3 RT-PCR引物设计 | 第36-37页 |
| 4.2.4 实时荧光定量PCR | 第37页 |
| 4.3 结果分析 | 第37-40页 |
| 4.3.1 组织差异性表达分析 | 第37-38页 |
| 4.3.2 不同胁迫下基因表达分析 | 第38-40页 |
| 4.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第五章 MsHSP70基因对拟南芥及苜蓿的转化 | 第42-51页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第42页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第42页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第42页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第42页 |
| 5.2 实验方法 | 第42-46页 |
| 5.2.1 超表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 5.2.2 农杆菌的转化及侵染拟南芥 | 第43页 |
| 5.2.3 对苜蓿的转化 | 第43-44页 |
| 5.2.4 转基因拟南芥基因组DNA的提取 | 第44页 |
| 5.2.5 转基因拟南芥鉴定 | 第44页 |
| 5.2.6 转基因拟南芥southern检测 | 第44-46页 |
| 5.3 结果分析 | 第46-49页 |
| 5.3.1 重组子的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| 5.3.2 转基因拟南芥鉴定 | 第47-48页 |
| 5.3.3 转基因苜蓿的获得及鉴定 | 第48-49页 |
| 5.4 讨论 | 第49-51页 |
| 第六章 转基因拟南芥的抗逆性鉴定 | 第51-60页 |
| 6.1 材料与试剂 | 第51页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 6.1.2 实验试剂 | 第51页 |
| 6.1.3 实验仪器 | 第51页 |
| 6.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 6.2.1 转基因拟南芥表达分析 | 第51页 |
| 6.2.2 转基因抗逆性鉴定 | 第51-53页 |
| 6.2.3 转基因拟南芥幼苗抗逆性评价 | 第53-54页 |
| 6.3 结果分析 | 第54-58页 |
| 6.3.1 MsHSP70基因在转基因植株的表达 | 第54页 |
| 6.3.2 转基因抗逆性鉴定 | 第54-57页 |
| 6.3.3 转基因拟南芥幼苗生长情况 | 第57-58页 |
| 6.4 讨论 | 第58-60页 |
| 第七章 结论与展望 | 第60-61页 |
| 7.1 结论 | 第60页 |
| 7.2 后续工作及展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简历 | 第70页 |
