| 缩写词 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 1 铁皮石斛离体培养条件优化 | 第10页 |
| 2 真菌诱导子对铁皮石斛总生物碱含量的影响 | 第10页 |
| 3 铁皮石斛HDR基因和ISPF基因的克隆和生物信息学分析 | 第10-11页 |
| 4 真菌诱导子处理下生物戚合成相关基因DoHDR与DoIspF基因相对表达量分析 | 第11-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第14-21页 |
| 1 石斛属植物离体培养研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1 有机添加物对药用石斛属植物离体培养的影响 | 第14-15页 |
| 1.2 植物激素对药用石斛属植物离体培养的影响 | 第15页 |
| 1.3 环境条件对药用石斛属植物离体培养的影响 | 第15-16页 |
| 1.4 其他因素对药用石斛属植物离体培养的影响 | 第16页 |
| 2 石斛属生物碱的研究进展 | 第16-17页 |
| 2.1 药理作用 | 第17页 |
| 2.2 影响生物碱含量的因素 | 第17页 |
| 3 诱导子研究进展 | 第17-18页 |
| 3.1 非生物诱导子 | 第17-18页 |
| 3.2 真菌诱导子 | 第18页 |
| 4 植物倍半萜合成途径以及相关酶基因 | 第18-19页 |
| 4.1 HDR基因研究进展 | 第18-19页 |
| 4.2 IspF基因研究进展 | 第19页 |
| 5 本研究的意义与主要内容 | 第19-21页 |
| 5.1 研究意义 | 第19-20页 |
| 5.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 铁皮石斛原球茎离体培养条件的优化 | 第21-46页 |
| 第一节 不同添加物对铁皮石斛原球茎增殖的影响 | 第21-29页 |
| 1 材料和方法 | 第21-22页 |
| 1.1 材料 | 第21页 |
| 1.2 试验方法 | 第21-22页 |
| 2 结果与分析 | 第22-28页 |
| 2.1 不同浓度水杨酸对铁皮石斛原球茎增殖的影响 | 第22-24页 |
| 2.2 不同浓度蛋白胨对铁皮石斛原球茎增殖的影响 | 第24-26页 |
| 2.3 不同浓度番茄汁对铁皮石斛原球茎增殖的影响 | 第26-28页 |
| 3. 讨论 | 第28-29页 |
| 3.1 水杨酸能够促进铁皮石斛原球茎的增殖 | 第28页 |
| 3.2 适当浓度的蛋白胨能够促进铁皮石斛原球茎增殖 | 第28-29页 |
| 3.3 适当浓度的番茄汁能够促进铁皮石斛原球茎增殖 | 第29页 |
| 第二节 混合天然有机添加物对铁皮石斛原球茎增殖的影响 | 第29-42页 |
| 1 材料与方法 | 第30-31页 |
| 1.1 材料 | 第30页 |
| 1.2 试验方法 | 第30页 |
| 1.3 基本培养条件 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-42页 |
| 2.1 香蕉与土豆混合物对铁皮石斛原球茎增殖情况的影响 | 第31-33页 |
| 2.2 苹果与土豆混合物对铁皮石斛原球茎增殖情况的影响 | 第33-36页 |
| 2.3 香蕉与苹果混合物对铁皮石斛原球茎增殖情况的影响 | 第36-39页 |
| 2.4 番茄与土豆混合物对铁皮石斛原球茎增殖情况的影响 | 第39-42页 |
| 3 讨论 | 第42页 |
| 3.1 天然有机添加物都能一定程度上促进铁皮石斛原球茎的增殖 | 第42页 |
| 3.2 土豆泥对铁皮石斛原球茎增殖的促进效果最佳 | 第42页 |
| 第三节 不同培养方式及不同容器对铁皮石斛原球茎增殖的影响 | 第42-46页 |
| 1 材料与方法 | 第43页 |
| 1.1 材料 | 第43页 |
| 1.2 试验方法 | 第43页 |
| 1.3 培养条件 | 第43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 第三章 真菌诱导子对铁皮石斛总生物碱含量的影响 | 第46-51页 |
| 第一节 不同浓度尖孢镰刀菌诱导子以及不同处理天数对铁皮石斛原球茎总生物碱含量的影响 | 第46-51页 |
| 1 材料与方法 | 第46-47页 |
| 1.1 材料 | 第46页 |
| 1.2 真菌诱导子制备方法 | 第46页 |
| 1.3 样品处理方法 | 第46-47页 |
| 1.4 总生物碱的测定方法 | 第47页 |
| 1.5 数据处理与分析 | 第47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-49页 |
| 2.1 添加100 mg/L真菌诱导子的情况下铁皮石斛原球茎总生物碱含量的变化 | 第47-48页 |
| 2.2 添加200 mg/L真菌诱导子的情况下铁皮石斛原球茎总生物碱含量的变化 | 第48页 |
| 2.3 添加500 mg/L真菌诱导子的情况下铁皮石斛原球茎总生物碱含量的变化 | 第48-49页 |
| 2.4 添加1000 mg/L真菌诱导子的情况下铁皮石斛原球茎总生物碱含量的变化 | 第49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 3.1 适当浓度的尖孢镰刀菌真菌诱导子促进铁皮石斛原球茎生物碱的合成与积累 | 第49-50页 |
| 3.2 尖孢镰刀菌诱导子处理合适的时间能够促进铁皮石斛原球茎合成与积累生物碱 | 第50-51页 |
| 第四章 铁皮石斛生物碱相关基因的克隆和生物信息学分析 | 第51-76页 |
| 第一节 铁皮石斛DoHDR基因的克隆和生物信息学分析 | 第51-63页 |
| 1 材料与方法 | 第51-52页 |
| 1.1 材料 | 第51页 |
| 1.2 方法 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-55页 |
| 2.1 DoHDR基因保守区克隆 | 第52-53页 |
| 2.2 DoHDR基因3’端克隆 | 第53页 |
| 2.3 DoHDR基因5’端克隆 | 第53-54页 |
| 2.4 DoHDR基因拼接验证 | 第54-55页 |
| 3 生物信息学分析 | 第55-62页 |
| 3.1 DoHDR基因所编码的蛋白质理化性质分析 | 第55-56页 |
| 3.2 蛋白质跨膜结构预测 | 第56-57页 |
| 3.3 蛋白质信号肽预测 | 第57-58页 |
| 3.4 蛋白质卷曲结构预测 | 第58页 |
| 3.5 蛋白质二级结构预测 | 第58-59页 |
| 3.6 蛋白质磷酸化位点预测 | 第59-60页 |
| 3.7 蛋白质功能位点预测 | 第60页 |
| 3.8 蛋白质三维结构预测 | 第60-61页 |
| 3.9 亚细胞定位预测 | 第61页 |
| 3.10 DoHDR蛋白系统进化树的构建 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 4.1 DoHDR基因与其他物种的相似性很大 | 第62页 |
| 4.2 DoHDR基因克隆的意义 | 第62-63页 |
| 第二节 铁皮石斛DoIspF基因的克隆和生物信息学分析 | 第63-76页 |
| 1. 材料与方法 | 第63-64页 |
| 1.1 材料 | 第63页 |
| 1.2 方法 | 第63-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-66页 |
| 2.1 DoIspF基因保守区的克隆 | 第64页 |
| 2.2 DoIspF基因3’端的克隆 | 第64-65页 |
| 2.3 DoIspF基因5’的克隆 | 第65页 |
| 2.4 DolspF基因拼接验证 | 第65-66页 |
| 3 生物信息学分析 | 第66-74页 |
| 3.1 DoIspF蛋白质理化性质分析 | 第66-67页 |
| 3.2 蛋白质跨膜结构预测 | 第67-68页 |
| 3.3 蛋白质信号肽预测 | 第68-69页 |
| 3.4 蛋白质卷曲结构预测 | 第69-70页 |
| 3.5 蛋白质二级结构预测 | 第70-72页 |
| 3.6 蛋白质磷酸化位点预测 | 第72页 |
| 3.7 蛋白质功能位点预测 | 第72页 |
| 3.8 蛋白质三维结构预测 | 第72-73页 |
| 3.9 亚细胞定位预测 | 第73页 |
| 3.10 DoIspF蛋白系统进化树的构建 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-76页 |
| 4.1 DoIspF基因与其他物种的相似性很大 | 第74页 |
| 4.2 基因DoIspF克隆的意义 | 第74-76页 |
| 第五章 铁皮石斛生物碱合成与积累相关基因定量表达分析 | 第76-86页 |
| 1 材料和方法 | 第76-79页 |
| 1.1 材料 | 第76页 |
| 1.2 材料处理方法 | 第76-77页 |
| 1.3 试剂与仪器 | 第77-78页 |
| 1.4 总RNA提取及cDNA合成 | 第78页 |
| 1.5 实时荧光定量PCR引物设计 | 第78页 |
| 1.6 实时荧光定量PCR反应体系 | 第78-79页 |
| 1.7 数据分析 | 第79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-84页 |
| 2.1 18sRNA、DoHDR、DoIspF基因标准曲线分析 | 第79页 |
| 2.2 铁皮石斛DoHDR基因相对表达量分析 | 第79-82页 |
| 2.3 铁皮石斛DoIspF基因相对表达量分析 | 第82-84页 |
| 3 讨论 | 第84-86页 |
| 3.1 DoHDR基因可能参与了铁皮石斛生物碱含量调控 | 第84-85页 |
| 3.2 DoIspF基因可能参与铁皮石斛生物碱合成 | 第85-86页 |
| 第六章 小结 | 第86-88页 |
| 1 铁皮石斛离体培养条件优化 | 第86页 |
| 2 真菌诱导子对铁皮石斛总生物碱含量的影响 | 第86-87页 |
| 3 铁皮石斛HDR基因和ISPF基因的克隆和生物信息学分析 | 第87页 |
| 4 真菌诱导子处理下生物碱合成相关基因DOHDR与DOISPF基因相对表达量分析 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-97页 |
| 附录 图版及图版说明 | 第97-111页 |
| 附录 DoHDR和DoIspF基祖(cDNA)序列登录 | 第111-115页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况、参加学术会议及获奖情况 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
