| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第16-25页 |
| 1.1 MSC与肿瘤微环境 | 第16-19页 |
| 1.1.1 肿瘤微环境的组成 | 第16页 |
| 1.1.2 MSC参与肿瘤微环境的形成 | 第16-18页 |
| 1.1.3 MSC与癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast, CAF) | 第18-19页 |
| 1.2 miRNA与肿瘤微环境 | 第19-21页 |
| 1.2.1 miRNA与肿瘤微环境 | 第19-20页 |
| 1.2.2 miR1555p与肿瘤微环境 | 第20-21页 |
| 1.3 研究目的、方法、技术路线及意义 | 第21-25页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第21页 |
| 1.3.2 研究方法 | 第21页 |
| 1.3.3 实验方案 | 第21-23页 |
| 1.3.4 预期结果及研究意义 | 第23-25页 |
| 第二章 GC-MSC与BM-MSC表型和功能差异 | 第25-37页 |
| 2.1 材料 | 第25-28页 |
| 2.1.1 标本的采集 | 第25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第25-27页 |
| 2.1.3 主要仪器及相关耗材 | 第27页 |
| 2.1.4 细胞株 | 第27-28页 |
| 2.1.5 实验动物 | 第28页 |
| 2.2 方法 | 第28-33页 |
| 2.2.1 BM-MSC的分离培养 | 第28页 |
| 2.2.2 GC-MSC与GCN-MSC的分离培养 | 第28页 |
| 2.2.3 MSC表面标记鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.4 成骨细胞诱导 | 第29页 |
| 2.2.5 成脂细胞诱导 | 第29页 |
| 2.2.6 细胞培养 | 第29页 |
| 2.2.7 MSC上清的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.8 免疫荧光 | 第30页 |
| 2.2.9 mRNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.10 mRNA逆转录 | 第30-31页 |
| 2.2.11 mRNA荧光实时定量PCR | 第31页 |
| 2.2.12 克隆形成实验 | 第31页 |
| 2.2.13 transwell迁移实验 | 第31-32页 |
| 2.2.14 transwell侵袭实验 | 第32页 |
| 2.2.15 裸鼠皮下致瘤模型 | 第32页 |
| 2.2.16 统计学分析 | 第32-33页 |
| 2.3 结果 | 第33-35页 |
| 2.3.1 BM-MSC、GC-MSC与GCN-MSC的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.2 BM-MSC与GC-MSC表型的差异 | 第34页 |
| 2.3.3 BM-MSC与GC-MSC功能的差异 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 miR1555p的下调促进BM-MSC向GC-MSC转分化 | 第37-45页 |
| 3.1 材料 | 第37页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第37页 |
| 3.2 方法 | 第37-40页 |
| 3.2.1 寡核苷酸片段配置 | 第38页 |
| 3.2.2 细胞转染 | 第38页 |
| 3.2.3 miRNA的提取 | 第38-39页 |
| 3.2.4 miRNA逆转录 | 第39页 |
| 3.2.5 miRNA荧光实时定量PCR | 第39-40页 |
| 3.3 结果 | 第40-43页 |
| 3.3.1 miR1555p在GC-MSC中表达下调 | 第40页 |
| 3.3.2 miR1555p的下调促进BM-MSC获得GC-MSC样表型 | 第40-41页 |
| 3.3.3 miR1555p的下调促进BM-MSC获得GC-MSC样功能 | 第41-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 miR1555p的下调靶向激活NF-κB p65促进BM-MSC向GC-MSC转分化 | 第45-61页 |
| 4.1 材料 | 第45-46页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第45-46页 |
| 4.1.2 主要仪器及相关耗材 | 第46页 |
| 4.1.3 细胞株 | 第46页 |
| 4.2 方法 | 第46-51页 |
| 4.2.1 靶基因预测 | 第46页 |
| 4.2.2 靶基因报告基因载体的构建 | 第46-49页 |
| 4.2.3 报告基因载体转染 | 第49页 |
| 4.2.4 启动子报告基因载体的构建与转染 | 第49页 |
| 4.2.5 报告基因检测 | 第49页 |
| 4.2.6 细胞蛋白提取 | 第49-50页 |
| 4.2.7 Western blot | 第50页 |
| 4.2.8 si-RNA的转染 | 第50页 |
| 4.2.9 PDTC的配制 | 第50-51页 |
| 4.2.10 统计学分析 | 第51页 |
| 4.3 结果 | 第51-59页 |
| 4.3.1 miR1555p靶向调控NF-κB p65 | 第51-52页 |
| 4.3.2 si-NF-κB p65对BM-MSC转分化作用的影响 | 第52-54页 |
| 4.3.3 miR1555p的下调促进NF-κBp65的活化 | 第54-55页 |
| 4.3.4 PDTC对BM-MSC转分化作用的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.5 miR1555p靶向调控IKBKE | 第56-57页 |
| 4.3.6 si-IKBKE对BM-MSC转分化作用的影响 | 第57-59页 |
| 4.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 GC-MSC表型和功能的维持依赖于NF-κB p65的持续活化 | 第61-71页 |
| 5.1 材料 | 第61-62页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第61-62页 |
| 5.1.2 主要仪器及相关耗材 | 第62页 |
| 5.1.3 细胞株 | 第62页 |
| 5.2 方法 | 第62-63页 |
| 5.2.1 免疫组织化学 | 第62-63页 |
| 5.2.2 si-RNA转染 | 第63页 |
| 5.3 结果 | 第63-69页 |
| 5.3.1 胃癌标本中IKBKE、NF-κB p65、phospho-NF-κB p65的表达 | 第63-65页 |
| 5.3.2 PDTC对GC-MSC的作用 | 第65-67页 |
| 5.3.3 NF-κB p65下游通路的活化对GC-MSC的作用 | 第67-69页 |
| 5.4 讨论 | 第69-71页 |
| 第六章 结论和展望 | 第71-73页 |
| 6.1 结论 | 第71页 |
| 6.2 展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及参加会议 | 第81页 |
