| 中文摘要 | 第3-4页 |
| 英文摘要 | 第4-5页 |
| 第一章 前言 | 第9-15页 |
| 第二章 实验材料 | 第15-23页 |
| 2.1 质粒、细胞株 | 第15页 |
| 2.2 实验试剂及耗材 | 第15-16页 |
| 2.3 实验主要仪器设备 | 第16-17页 |
| 2.4 引物设计 | 第17-18页 |
| 2.5 主要试剂以及配置 | 第18-23页 |
| 第三章 实验方法 | 第23-41页 |
| 3.1 真核表达质粒pCMV-hBD2重组 | 第23-30页 |
| 3.1.1 菌株的扩大培养 | 第23-24页 |
| 3.1.2 DNA质粒提取 | 第24-25页 |
| 3.1.3 双酶切反应 | 第25页 |
| 3.1.4 DNA琼脂糖凝胶电泳后目的产物回收 | 第25-27页 |
| 3.1.5 连接反应 | 第27页 |
| 3.1.6 转化 | 第27-28页 |
| 3.1.7 重组质粒DNA获取 | 第28-29页 |
| 3.1.8 重组质粒pCMV-hBD2检测 | 第29-30页 |
| 3.1.9 菌株冻存 | 第30页 |
| 3.2 细胞培养 | 第30-32页 |
| 3.2.1 细胞培养前准备 | 第30页 |
| 3.2.2 细胞复苏 | 第30-31页 |
| 3.2.3 细胞传代 | 第31页 |
| 3.2.4 细胞冻存 | 第31-32页 |
| 3.3 细胞转染 | 第32-33页 |
| 3.3.1 细胞准备 | 第32页 |
| 3.3.2 转染溶液配置 | 第32页 |
| 3.3.3 瞬时转染 | 第32-33页 |
| 3.4 荧光实时定量PCR | 第33-35页 |
| 3.4.1 各细胞总RNA提取 | 第33页 |
| 3.4.2 RNA浓度测定 | 第33页 |
| 3.4.3 RNA逆转录cDNA | 第33-34页 |
| 3.4.4 荧光定量PCR | 第34-35页 |
| 3.5 细胞增殖实验 | 第35页 |
| 3.5.1 细胞准备 | 第35页 |
| 3.5.2 MTS法检测 | 第35页 |
| 3.6 肿瘤细胞克隆形成实验 | 第35-36页 |
| 3.6.1 克隆细胞培养 | 第35-36页 |
| 3.6.2 结晶紫染色计数 | 第36页 |
| 3.7 Transwell迁移及侵袭小室 | 第36-37页 |
| 3.7.1 肿瘤细胞饥饿处理 | 第36页 |
| 3.7.2 肿瘤侵袭实验预铺胶 | 第36页 |
| 3.7.3 肿瘤迁移、侵袭实验 | 第36页 |
| 3.7.4 结晶紫染色计数 | 第36-37页 |
| 3.8 Western blotting | 第37-40页 |
| 3.8.1 细胞总蛋白提取 | 第37页 |
| 3.8.2 BCA法测定蛋白定量 | 第37-38页 |
| 3.8.3 制胶 | 第38页 |
| 3.8.4 蛋白电泳 | 第38页 |
| 3.8.5 电转移 | 第38-39页 |
| 3.8.6 免疫印记 | 第39页 |
| 3.8.7 Western blotting结果分析 | 第39-40页 |
| 3.9 数据统计分析 | 第40-41页 |
| 第四章 实验结果 | 第41-45页 |
| 4.1 重组真核表达载体pCMV-hBD2 | 第41页 |
| 4.2 瞬时转染hBD2表达情况 | 第41-42页 |
| 4.2.1 mRNA水平检测hBD2表达情况 | 第41-42页 |
| 4.2.2 蛋白水平检测hBD2表达情况 | 第42页 |
| 4.3 hBD2对细胞增殖及克隆的影响 | 第42-43页 |
| 4.3.1 hBD2对细胞增殖的影响 | 第42页 |
| 4.3.2 hBD2对细胞克隆的影响 | 第42-43页 |
| 4.4 hBD2对细胞迁移及侵袭的影响 | 第43-44页 |
| 4.4.1 hBD2对BGC823迁移的影响 | 第43页 |
| 4.4.2 hBD2对BGC823侵袭的影响 | 第43-44页 |
| 4.5 检测影响对胃腺癌BGC823细胞MMP2表达的影响 | 第44-45页 |
| 4.5.1 荧光实时定量PCR检测MMP2表达 | 第44页 |
| 4.5.2 Western blotting检测hBD2对MMP2表达情况 | 第44-45页 |
| 第五章 讨论 | 第45-48页 |
| 第六章 结论 | 第48-49页 |
| 第七章 参考文献 | 第49-54页 |
| 第八章 图片附录 | 第54-66页 |
| 在校期间的研究成果 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
