| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 前言 | 第8-19页 |
| 1.1 蛋白酶的分类 | 第8-10页 |
| 1.2 蛋白酶的性质 | 第10-12页 |
| 1.3 蛋白酶发酵菌株的基因工程育种 | 第12-13页 |
| 1.4 微生物蛋白酶的分离纯化 | 第13-14页 |
| 1.5 蛋白酶的应用 | 第14-16页 |
| 1.5.1 蛋白酶在医药领域的应用 | 第14-15页 |
| 1.5.2 蛋白酶在食品领域的应用 | 第15-16页 |
| 1.5.3 蛋白酶在制革工艺的应用 | 第16页 |
| 1.6 地衣芽胞杆菌表达系统 | 第16-17页 |
| 1.7 本课题的立题依据与研究内容 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 菌株、质粒与引物 | 第19-20页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第21页 |
| 2.1.4 主要溶液与缓冲液 | 第21-23页 |
| 2.1.5 主要培养基 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-31页 |
| 2.2.1 总DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 基因克隆 | 第24页 |
| 2.2.3 重组表达载体的构建 | 第24-26页 |
| 2.2.4 重组地衣芽胞杆菌的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.5 重组转化子的摇瓶发酵 | 第27页 |
| 2.2.6 蛋白酶酶活力测定 | 第27-29页 |
| 2.2.7 碱性蛋白酶酶酶学性质分析 | 第29-30页 |
| 2.2.8 氨基酸序列及酶结构分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与讨论 | 第31-46页 |
| 3.1 嗜碱性蛋白酶产生菌的筛选 | 第31页 |
| 3.2 地衣芽胞杆菌蛋白酶基因的克隆 | 第31-33页 |
| 3.2.1 地衣芽胞杆菌总DNA的提取 | 第31-32页 |
| 3.2.2 地衣芽胞杆菌蛋白酶基因的克隆 | 第32-33页 |
| 3.3 重组表达载体的构建 | 第33-35页 |
| 3.4 重组菌产酶状况初步鉴定 | 第35-36页 |
| 3.5 重组菌Z113 (pHY-AprE209),Z113 (pHY-AprE2709)的构建 | 第36页 |
| 3.6 重组菌Z113 (pHY-AprE209),Z113 (pHY-AprE2709)稳定性验证 | 第36-37页 |
| 3.7 重组菌Z113 (pHY-AprE209),Z113 (pHY-AprE2709)的产酶特性 | 第37-38页 |
| 3.8 重组菌Z113 (pHY-AprE209),Z113 (pHY-AprE2709)的酶学性质 | 第38-43页 |
| 3.8.1 最适反应pH | 第38-39页 |
| 3.8.2 pH稳定性 | 第39-40页 |
| 3.8.3 最适反应温度 | 第40-41页 |
| 3.8.4 热稳定性 | 第41-42页 |
| 3.8.5 金属离子及化合物对AprE209、AprE2709酶活的影响 | 第42-43页 |
| 3.8.6 K_m和V_(max)的测定 | 第43页 |
| 3.9 AprE2709和ApE209蛋白质序列分析 | 第43-46页 |
| 4 结论 | 第46-47页 |
| 5 展望 | 第47-48页 |
| 6 参考文献 | 第48-56页 |
| 7 攻读学位期间发表论文情况 | 第56-57页 |
| 8 致谢 | 第57-58页 |
| 9 附录 | 第58-59页 |
