| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 嘌呤核苷磷酸化酶概述 | 第8-10页 |
| 1.1.1 PNPase的定义与作用 | 第8页 |
| 1.1.2 PNPase的来源和分类 | 第8-9页 |
| 1.1.3 PNPase的应用 | 第9-10页 |
| 1.2 PNPase国内外研究进展 | 第10-11页 |
| 1.3 啤酒及生产过程中嘌呤类物质 | 第11-12页 |
| 1.4 课题研究背景与意义 | 第12-13页 |
| 1.5 主要研究目的与内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-22页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-16页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第14页 |
| 2.1.2 主要原料 | 第14页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第14-15页 |
| 2.1.4 实验溶液配制 | 第15-16页 |
| 2.2 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.3 实验方法 | 第17-21页 |
| 2.3.1 大肠杆菌PNPase基因合成和引物设计 | 第17页 |
| 2.3.2 PCR扩增 | 第17页 |
| 2.3.3 DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第17页 |
| 2.3.4 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第17-18页 |
| 2.3.5 克隆载体和表达载体的构建 | 第18页 |
| 2.3.6 目的蛋白的诱导表达及条件优化 | 第18-19页 |
| 2.3.7 目的蛋白的一步分离纯化 | 第19页 |
| 2.3.8 蛋白质SDS-PAGE | 第19页 |
| 2.3.9 麦汁制备工艺 | 第19-20页 |
| 2.3.10 啤酒发酵工艺 | 第20-21页 |
| 2.4 分析测定方法 | 第21-22页 |
| 2.4.1 蛋白质含量测定 | 第21页 |
| 2.4.2 高效液相色谱（HPLC）检测嘌呤含量 | 第21页 |
| 2.4.3 PNPase酶活性测定 | 第21-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-42页 |
| 3.1 PNPase基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 | 第22-24页 |
| 3.1.1 基因克隆 | 第22页 |
| 3.1.2 表达载体的构建 | 第22-23页 |
| 3.1.3 目的蛋白的诱导表达 | 第23页 |
| 3.1.4 目的蛋白的酶活测定 | 第23-24页 |
| 3.2 PNPase诱导表达条件的优化 | 第24-27页 |
| 3.2.1 重组大肠杆菌生长曲线的确定 | 第24-25页 |
| 3.2.2 不同时机加入诱导剂对PNPase活力的影响 | 第25-26页 |
| 3.2.3 不同浓度的诱导剂对PNPase活力的影响 | 第26页 |
| 3.2.4 不同的诱导表达时间对PNPase活力的影响 | 第26-27页 |
| 3.2.5 不同的诱导温度对PNPase活力的影响 | 第27页 |
| 3.3 PNPase粗酶液的分离纯化与酶学性质研究 | 第27-33页 |
| 3.3.1 PNPase粗酶液的镍柱亲和分离纯化 | 第27-28页 |
| 3.3.2 PNPase最适作用pH及pH稳定性 | 第28-29页 |
| 3.3.3 PNPase最适作用温度及热稳定性 | 第29-30页 |
| 3.3.4 PNPase对底物的特异性 | 第30-31页 |
| 3.3.5 金属离子对PNPase稳定性的影响 | 第31-32页 |
| 3.3.6 PNPase动力学研究 | 第32-33页 |
| 3.4 PNPase在啤酒生产中的应用 | 第33-42页 |
| 3.4.1 市售啤酒中嘌呤类物质含量的检测 | 第33-35页 |
| 3.4.2 PNPase添加量对麦汁中嘌呤含量的影响 | 第35页 |
| 3.4.3 PNPase添加时间对麦汁中嘌呤含量的影响 | 第35-36页 |
| 3.4.4 添加PNPase对不同辅料及比例所酿造麦汁与发酵液中嘌呤含量的影响 | 第36-42页 |
| 结论与展望 | 第42-44页 |
| 结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第48页 |
