| 论文创新点 | 第5-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13页 |
| 第一章 天然免疫系统 | 第15-51页 |
| 1.1 TLRs | 第18-26页 |
| 1.1.1 病毒激活的TLRs | 第18-22页 |
| 1.1.2 细菌激活的TLRs | 第22-25页 |
| 1.1.3 识别真菌的TLRs | 第25-26页 |
| 1.1.4 识别原生动物寄生虫的TLRs | 第26页 |
| 1.2 TLR信号通路 | 第26-30页 |
| 1.2.1 MyD88依赖的TLR信号通路 | 第27-28页 |
| 1.2.2 TRIF依赖的TLR信号通路 | 第28-30页 |
| 1.3 RLRs | 第30-33页 |
| 1.3.1 RIG-Ⅰ | 第30-32页 |
| 1.3.2 MDA5 | 第32页 |
| 1.3.3 LGP2 | 第32-33页 |
| 1.4 RLRs信号通路 | 第33-36页 |
| 1.4.1 IPS-1的激活 | 第33-34页 |
| 1.4.2 IPS-1介导的四条信号通路 | 第34-36页 |
| 1.4.3 抗病毒产物的表达及效应 | 第36页 |
| 1.5 NLRs | 第36-39页 |
| 1.5.1 NODs | 第37-38页 |
| 1.5.2 NLRPs | 第38页 |
| 1.5.3 IPAF | 第38页 |
| 1.5.4 其他DNA识别受体 | 第38-39页 |
| 1.6 转录因子 | 第39-47页 |
| 1.6.1 NF-κB激活 | 第40-42页 |
| 1.6.2 IRFs | 第42-44页 |
| 1.6.3 MAPKs激活 | 第44-47页 |
| 1.7 促炎症细胞因子 | 第47-51页 |
| 1.7.1 IL6 | 第48-49页 |
| 1.7.2 IL8 | 第49-51页 |
| 第二章 主要穹窿蛋白 | 第51-56页 |
| 2.1 穹窿蛋白(vault) | 第51-52页 |
| 2.2 主要穹窿蛋白 | 第52页 |
| 2.3 MVP的功能研究 | 第52-56页 |
| 2.3.1 MVP与耐药性 | 第52-53页 |
| 2.3.2 MVP与核质运输 | 第53页 |
| 2.3.3 MVP与信号通路 | 第53-54页 |
| 2.3.4 MVP与分化 | 第54页 |
| 2.3.5 MVP与细胞自噬 | 第54页 |
| 2.3.6 MVP与细菌内化 | 第54-55页 |
| 2.3.7 MVP与病毒 | 第55-56页 |
| 第三章 主要穹窿蛋白(MVP)与炎症 | 第56-78页 |
| 3.1 实验材料 | 第56-58页 |
| 3.1.1 血液样本 | 第56页 |
| 3.1.2 细胞与病毒 | 第56-57页 |
| 3.1.3 质粒构建 | 第57页 |
| 3.1.4 试剂 | 第57-58页 |
| 3.2 实验方法 | 第58-72页 |
| 3.2.1 流感病毒在鸡胚中扩增 | 第58-59页 |
| 3.2.2 外周血单核细胞(PBMC)分离及电转 | 第59-60页 |
| 3.2.3 质粒的转化及提取 | 第60页 |
| 3.2.4 细胞的培养及转染 | 第60-63页 |
| 3.2.5 RNA的提取及逆转录 | 第63-64页 |
| 3.2.6 实时荧光定量PCR(Real-time PCR) | 第64页 |
| 3.2.7 蛋白质免疫印迹实验 | 第64-67页 |
| 3.2.8 MVP稳定敲减细胞系的构建 | 第67-71页 |
| 3.2.9 荧光素酶(luciferase)报告基因实验 | 第71-72页 |
| 3.3 实验结果 | 第72-76页 |
| 3.3.1 IAV和polyI：C诱导MVP表达 | 第72页 |
| 3.3.2 MVP瞬时敲减下调IAV和polyI：C诱导的IL6,IL8表达水平 | 第72-73页 |
| 3.3.3 MVP稳定敲减细胞系中IL6,IL8表达水平受损 | 第73-75页 |
| 3.3.4 MVP上调IL6和IL8启动子活性 | 第75-76页 |
| 3.4 讨论 | 第76-78页 |
| 第四章 MVP与转录因子c-fos,C/EBP-LAP相互作用 | 第78-90页 |
| 4.1 实验材料 | 第78-79页 |
| 4.1.1 质粒 | 第78页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第78-79页 |
| 4.2 实验方法 | 第79-83页 |
| 4.2.1 表达质粒构建 | 第79-81页 |
| 4.2.2 荧光素酶启动子实验 | 第81-82页 |
| 4.2.3 免疫共沉淀实验 | 第82-83页 |
| 4.2.4 免疫荧光共聚焦实验(confocal) | 第83页 |
| 4.3 实验结果 | 第83-88页 |
| 4.3.1 MVP与转录因子协同激活IL6和IL8启动子 | 第83-84页 |
| 4.3.2 MVP与转录因子c-Fos及C/EBPβ-LAP相互作用 | 第84-88页 |
| 4.4 讨论 | 第88-90页 |
| 第五章 IAV或polyI:C诱导MVP入核 | 第90-93页 |
| 5.1 实验材料 | 第90页 |
| 5.2 实验方法 | 第90-91页 |
| 5.2.1 核抽提实验 | 第90-91页 |
| 5.2.2 免疫共聚焦实验 | 第91页 |
| 5.3 实验结果 | 第91-92页 |
| 5.4 讨论 | 第92-93页 |
| 第六章 MVP促进转录因子c-Fos,C/EBP-LAP入核 | 第93-97页 |
| 6.1 实验材料 | 第93页 |
| 6.2 实验方法 | 第93-94页 |
| 6.2.1 细胞培养 | 第93页 |
| 6.2.2 细胞计数 | 第93-94页 |
| 6.2.3 细胞转染 | 第94页 |
| 6.2.4 核抽提实验 | 第94页 |
| 6.3 实验结果 | 第94-96页 |
| 6.3.1 MVP促进转录因子入核 | 第94-95页 |
| 6.3.2 MVP敲减不影响转录因子表达水平 | 第95-96页 |
| 6.4 讨论 | 第96-97页 |
| 第七章 MVP促进IL6和IL8启动子募集转录因子 | 第97-106页 |
| 7.1 实验材料 | 第97-98页 |
| 7.1.1 质粒 | 第97页 |
| 7.1.2 细胞培养 | 第97页 |
| 7.1.3 试剂 | 第97-98页 |
| 7.2 实验方法 | 第98-101页 |
| 7.2.1 荧光索酶报告基因实验 | 第98页 |
| 7.2.2 染色质免疫共沉淀 | 第98-101页 |
| 7.3 实验结果 | 第101-105页 |
| 7.3.1 MVP激活IL6和IL8启动子依赖于c-Fos或者C/EBPβ结合位点完整性 | 第101-102页 |
| 7.3.2 MVP增加IL6和IL8启动子上转录因子丰度 | 第102-105页 |
| 7.4 讨论 | 第105-106页 |
| 第八章 MVP~(-/-)小鼠来源的原代细胞中细胞因子表达 | 第106-116页 |
| 8.1 实验材料 | 第106-107页 |
| 8.1.1 实验动物 | 第106页 |
| 8.1.2 实验试剂 | 第106-107页 |
| 8.2 实验方法 | 第107-110页 |
| 8.2.1 小鼠脾脏细胞的分离 | 第107页 |
| 8.2.2 小鼠腹腔巨噬细胞的分离 | 第107-108页 |
| 8.2.3 小鼠PBMC的分离 | 第108-109页 |
| 8.2.4 半定量PCR | 第109页 |
| 8.2.5 蛋白质免疫印迹 | 第109页 |
| 8.2.6 实时荧光定量PCR | 第109-110页 |
| 8.3 实验结果 | 第110-114页 |
| 8.3.1 MVP~(-/-)小鼠原代细胞中MVP表达量检测 | 第110-111页 |
| 8.3.2 MVP~(-/-)脾脏细胞中细胞因子表达受损 | 第111-113页 |
| 8.3.3 MVP~(-/-)腹腔巨噬细胞中细胞因子表达受损 | 第113-114页 |
| 8.3.4 MVP~(-/-)外周血淋巴细胞中细胞因子表达受损 | 第114页 |
| 8.4 讨论 | 第114-116页 |
| 第九章 MVP~(-/-)小鼠对流感病毒感染抵抗削弱 | 第116-125页 |
| 9.1 实验材料 | 第116-117页 |
| 9.1.1 实验动物 | 第116页 |
| 9.1.2 病毒与细胞 | 第116-117页 |
| 9.1.3 实验试剂 | 第117页 |
| 9.2 实验方法 | 第117-119页 |
| 9.2.1 鼠适应性流感病毒的扩增 | 第117页 |
| 9.2.2 流感病毒感染小鼠模型 | 第117页 |
| 9.2.3 死亡率测定 | 第117-118页 |
| 9.2.4 肺重/体重指标的测定 | 第118页 |
| 9.2.5 肺部流感病毒滴度测定 | 第118页 |
| 9.2.6 肺部细胞因子测定 | 第118-119页 |
| 9.2.7 病理切片及HE染色 | 第119页 |
| 9.3 实验结果 | 第119-123页 |
| 9.3.1 MVP敲除对感染IAV小鼠存活率的影响研究 | 第119-120页 |
| 9.3.2 MVP敲除对小鼠肺损伤的研究 | 第120-121页 |
| 9.3.3 野生型和MVP~(-/-)小鼠肺组织中IAV复制情况的研究 | 第121页 |
| 9.3.4 野生型和MVP~(-/-)小鼠肺组织中炎症因子表达的研究 | 第121-122页 |
| 9.3.5 IAV引起的野生型和MVP~(-/-)小鼠肺部病理进程的研究 | 第122-123页 |
| 9.4 讨论 | 第123-125页 |
| 第十章 研究总结 | 第125-127页 |
| 参考文献 | 第127-143页 |
| 博士在读期间已发表的文章 | 第143-144页 |
| 附录 | 第144-150页 |
| 附录Ⅰ 常用试剂配制 | 第144-149页 |
| 附录Ⅱ 论文使用引物 | 第149-150页 |
| 致谢 | 第150-151页 |
