| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 核酸酶 | 第12-16页 |
| 1.1.1 核酸酶简介 | 第12-13页 |
| 1.1.2 核糖核酸外切酶超家族 | 第13-16页 |
| 1.2 农杆菌 | 第16-17页 |
| 1.2.1 农杆菌简介 | 第16页 |
| 1.2.2 农杆菌基因结构 | 第16-17页 |
| 1.2.3 农杆菌致病机理 | 第17页 |
| 1.3 鼠伤寒沙门氏菌 | 第17-19页 |
| 1.4 课题研究主要内容及意义 | 第19-22页 |
| 1.4.1 农杆菌蛋白Atu4108研究内容及意义 | 第19页 |
| 1.4.2 鼠伤寒沙门氏菌蛋白STM1987,ArtI研究内容及意义 | 第19-22页 |
| 第2章 Atu4108的蛋白质表达与纯化 | 第22-34页 |
| 2.1 Atu4108蛋白介绍及分析 | 第22-23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.2.1 实验所用仪器 | 第23页 |
| 2.2.2 所用工具酶以及试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.3 实验所用仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.4 主要实验所用缓冲液以及试剂配制 | 第25页 |
| 2.3 实验方法以及流程 | 第25-29页 |
| 2.3.1 所用引物设计 | 第25页 |
| 2.3.2 基因载体的构建 | 第25-27页 |
| 2.3.3 转化 | 第27-29页 |
| 2.4 蛋白质的表达与纯化 | 第29-31页 |
| 2.5 蛋白质纯化结果 | 第31-33页 |
| 2.6 本章小结 | 第33-34页 |
| 第3章 Atu4108晶体普筛,优化以及结构解析 | 第34-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.1.1 蛋白质结晶所用材料 | 第34页 |
| 3.1.2 收集晶体数据所用仪器材料 | 第34页 |
| 3.2 蛋白质结晶及晶体获得优化过程 | 第34-37页 |
| 3.2.1 c-di-GMP的合成 | 第34-35页 |
| 3.2.2 结晶原理 | 第35页 |
| 3.2.3 蛋白质晶体普筛 | 第35-36页 |
| 3.2.4 蛋白质晶体优化 | 第36页 |
| 3.2.5 晶体的冻存 | 第36-37页 |
| 3.3 蛋白质晶体结构的解析 | 第37-38页 |
| 3.3.1 结构解析原理以及常用方法 | 第37-38页 |
| 3.3.2 Atu4108蛋白质解析过程 | 第38页 |
| 3.4 聚集态确定 | 第38页 |
| 3.5 实验结果 | 第38-42页 |
| 3.5.1 晶体普筛及优化结果 | 第38-40页 |
| 3.5.2 Atu4108结构数据 | 第40-41页 |
| 3.5.3 Atu4108聚集态结果 | 第41-42页 |
| 3.6 Atu4108蛋白质结构分析 | 第42-45页 |
| 3.7 本章小结 | 第45-46页 |
| 第4章 Atu4108活性研究 | 第46-54页 |
| 4.1 Atu4108酶活力检测方法 | 第46页 |
| 4.1.1 蛋白质降解核酸的活性检测方法 | 第46页 |
| 4.1.2 DNA结合能力检测方法 | 第46页 |
| 4.2 实验结果 | 第46-53页 |
| 4.2.1 突变体蛋白纯化结果 | 第46-49页 |
| 4.2.2 突变体蛋白晶体优化结果 | 第49-50页 |
| 4.2.3 Atu4108与DNA,RNA结合能力酶活实验结果 | 第50-53页 |
| 4.3 本章小结 | 第53-54页 |
| 第5章 DNA进入Atu4108通路 | 第54-60页 |
| 5.1 实验方法 | 第54-55页 |
| 5.2 实验结果 | 第55-58页 |
| 5.2.1 蛋白质纯化结果 | 第55-57页 |
| 5.2.2 突变体酶活实验结果 | 第57-58页 |
| 5.3 本章小结 | 第58-60页 |
| 第6章 鼠伤寒沙门氏菌蛋白Cache1与ArtI的蛋白质结构及功能相关研究 | 第60-78页 |
| 6.1 Cache1与ArtI的蛋白质生物学分析 | 第60-62页 |
| 6.1.1 Cache1生物学分析 | 第60-61页 |
| 6.1.2 ArtⅠ生物学分析 | 第61-62页 |
| 6.2 实验方法 | 第62-66页 |
| 6.2.1 ArtⅠ与Cache1相关克隆 | 第62-63页 |
| 6.2.2 ArtⅠ与Cache1蛋白质的表达与纯化 | 第63-64页 |
| 6.2.3 ArtⅠ与Cache1的蛋白质晶体普筛 | 第64-65页 |
| 6.2.4 ArtⅠ与Cache1的晶体优化 | 第65-66页 |
| 6.2.5 ArtⅠ与Cache1 pull down实验 | 第66页 |
| 6.2.6 Cache1酶切实验 | 第66页 |
| 6.3 实验结果 | 第66-76页 |
| 6.3.1 ArtⅠ全长蛋白纯化结果 | 第66-68页 |
| 6.3.2 ArtⅠ蛋白质晶体普筛优化结果 | 第68-69页 |
| 6.3.3 ArtⅠ蛋白质结构 | 第69-71页 |
| 6.3.4 Cache1蛋白质纯化结果 | 第71-73页 |
| 6.3.5 Cache1晶体普筛优化结果 | 第73-75页 |
| 6.3.6 Cache1蛋白胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶酶切结果 | 第75页 |
| 6.3.7 ArtⅠ与Cache1蛋白质相互作用实验 | 第75-76页 |
| 6.4 本章小结 | 第76-78页 |
| 全文总结 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第85页 |
