| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 符号说明及缩略词 | 第12-13页 |
| 第一章 研究的背景及意义 | 第13-29页 |
| 1.1 糖苷水解酶的组成 | 第13-17页 |
| 1.1.1 糖苷水解酶的来源 | 第13-14页 |
| 1.1.2 糖苷水解酶的传统(酶学)分类和CAZy分类 | 第14-17页 |
| 1.2 糖苷水解酶GH5家族 | 第17-21页 |
| 1.2.1 糖苷水解酶GH5家族概况 | 第17页 |
| 1.2.2 糖苷水解酶GH5家族的底物特异性 | 第17-18页 |
| 1.2.3 糖苷水解酶GH5家族的结构与功能 | 第18-19页 |
| 1.2.4 糖苷水解酶GH5家族的酶学性质及应用 | 第19-21页 |
| 1.3 糖苷水解酶GH12家族 | 第21-26页 |
| 1.3.1 糖苷水解酶GH12家族概况 | 第21页 |
| 1.3.2 糖苷水解酶GH12家族的底物特异性 | 第21-22页 |
| 1.3.3 糖苷水解酶GH12家族的结构与功能 | 第22-25页 |
| 1.3.4 糖苷水解酶GH12家族的酶学性质及应用 | 第25-26页 |
| 1.4 组成型纤维素酶 | 第26-27页 |
| 1.5 本研究的立题依据 | 第27-29页 |
| 第二章 GH5、GH12家族内切酶在毕赤酵母中的表达及酶学性质的测定 | 第29-51页 |
| 引言 | 第29页 |
| 2.1 材料和方法 | 第29-40页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第29-30页 |
| 2.1.2 培养基和培养方法 | 第30-31页 |
| 2.1.3 常用的储备液及缓冲液 | 第31-32页 |
| 2.1.4 常用试剂和仪器 | 第32页 |
| 2.1.5 丝状真菌总RNA的提取及反转录 | 第32-33页 |
| 2.1.6 合成引物与克隆目的片段 | 第33-34页 |
| 2.1.7 毕赤酵母异源表达重组载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.1.8 大肠杆菌的转化 | 第35-36页 |
| 2.1.9 毕赤酵母感受态细胞的制备和转化 | 第36页 |
| 2.1.10 转化子的PCR验证 | 第36-37页 |
| 2.1.11 重组蛋白的诱导表达 | 第37页 |
| 2.1.12 重组蛋白的分离纯化 | 第37页 |
| 2.1.13 重组蛋白的底物谱测定 | 第37-39页 |
| 2.1.14 重组蛋白的N-糖基化分析与活性染色 | 第39页 |
| 2.1.15 水解产物的检测与分析 | 第39页 |
| 2.1.16 温度和pH对酶活力的影响 | 第39-40页 |
| 2.2 结果和讨论 | 第40-49页 |
| 2.2.1 GH5与GH12家族酶蛋白的生物信息学分析 | 第40-41页 |
| 2.2.2 重组载体的构建 | 第41-42页 |
| 2.2.3 GH5和GH12家族蛋白的重组表达 | 第42-43页 |
| 2.2.4 重组蛋白的去糖基化 | 第43-44页 |
| 2.2.5 重组蛋白的底物特异性和活性电泳分析 | 第44-45页 |
| 2.2.6 温度和pH对重组酶活力的影响 | 第45-47页 |
| 2.2.7 重组蛋白水解RAC的产物分析 | 第47-49页 |
| 2.3 本章小结 | 第49-51页 |
| 第三章 草酸青霉组成型纤维素酶生理作用的研究 | 第51-69页 |
| 引言 | 第51页 |
| 3.1 材料和方法 | 第51-60页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第51-52页 |
| 3.1.2 培养基 | 第52页 |
| 3.1.3 常用的储备液和缓冲液 | 第52-53页 |
| 3.1.4 纤维素酶基因的表达量分析 | 第53页 |
| 3.1.5 草酸青霉114-2基因组的提取 | 第53-54页 |
| 3.1.6 PCR引物设计 | 第54-57页 |
| 3.1.7 草酸青霉原生质体的制备及转化 | 第57-58页 |
| 3.1.8 敲除株的构建原理 | 第58页 |
| 3.1.9 敲除株的验证 | 第58页 |
| 3.1.10 单基因敲除菌株的构建 | 第58-59页 |
| 3.1.11 双基因敲除菌株的构建 | 第59页 |
| 3.1.12 敲除株的表型观察 | 第59-60页 |
| 3.1.13 敲除株的孢子萌发观察 | 第60页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第60-68页 |
| 3.2.1 五种组成型表达纤维素酶基因的鉴定 | 第60-61页 |
| 3.2.2 基因敲除盒的构建 | 第61-62页 |
| 3.2.3 组成型纤维素酶单基因敲除株的验证 | 第62-63页 |
| 3.2.4 组成型纤维素酶双基因敲除菌株的验证 | 第63-64页 |
| 3.2.5 基因敲除菌株的表型分析 | 第64-65页 |
| 3.2.6 基因敲除株孢子萌发的观察 | 第65-68页 |
| 3.3 本章小结 | 第68-69页 |
| 论文创新性成果及展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第88页 |
