| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 利巴韦林概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 利巴韦林的理化性质 | 第10页 |
| 1.1.2 利巴韦林的用途 | 第10-11页 |
| 1.1.3 国内外利巴韦林生产技术 | 第11-12页 |
| 1.1.4 酶法研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2 嘌呤核苷磷酸化酶 | 第13-14页 |
| 1.2.1 嘌呤核苷磷酸化酶的性质 | 第13-14页 |
| 1.2.2 嘌呤核苷磷酸化酶的研究状况 | 第14页 |
| 1.3 细胞固定化技术 | 第14-16页 |
| 1.3.1 引言 | 第14-15页 |
| 1.3.2 固定化细胞的制备方法 | 第15-16页 |
| 1.3.3 固定化细胞的应用 | 第16页 |
| 1.4 利巴韦林的提取精制工艺 | 第16-20页 |
| 1.4.1 活性炭吸附技术[53] | 第16-18页 |
| 1.4.2 结晶技术 | 第18-20页 |
| 1.5 本论文的立题背景及主要内容 | 第20-22页 |
| 1.5.1 立题背景 | 第20页 |
| 1.5.2 本论文的主要研究内容 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.1 质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株 | 第22页 |
| 2.2 主要仪器和试剂 | 第22-26页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.3 主要溶液 | 第24-25页 |
| 2.2.4 培养基 | 第25-26页 |
| 2.2.5 抗生素 | 第26页 |
| 2.3 试验方法 | 第26-35页 |
| 2.3.1 枯草芽孢杆菌基因组提取 | 第26页 |
| 2.3.2 质粒提取 | 第26-27页 |
| 2.3.3 目的基因扩增 | 第27页 |
| 2.3.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| 2.3.5 DNA的回收纯化 | 第27-28页 |
| 2.3.6 大肠杆菌化转感受态制备及化学转化 | 第28-29页 |
| 2.3.7 表达载体连接与鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.8 嘌呤核苷磷酸化酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第30-31页 |
| 2.3.9 培养方法 | 第31页 |
| 2.3.10 固定化细胞的制备[79-81] | 第31页 |
| 2.3.11 分析方法 | 第31-35页 |
| 3 结果与讨论 | 第35-56页 |
| 3.1 不同菌株组成型与诱导型表达嘌呤核苷磷酸化酶催化合成利巴韦林的比较 | 第35-38页 |
| 3.1.1 诱导型和组成型工程菌构建 | 第35页 |
| 3.1.2 诱导型和组成型表达PNPase菌体生物量 | 第35-36页 |
| 3.1.3 组成型细胞催化合成利巴韦林 | 第36-37页 |
| 3.1.4 诱导型细胞催化合成利巴韦林 | 第37-38页 |
| 3.1.5 小结与讨论 | 第38页 |
| 3.2 固定化重组大肠杆菌BL21(pET-His-pupG)催化合成利巴韦林 | 第38-48页 |
| 3.2.1 重组大肠杆菌的构建 | 第38-41页 |
| 3.2.2 嘌呤核苷磷酸化酶的表达及活性测定 | 第41-44页 |
| 3.2.3 重组菌细胞固定化方法的选择 | 第44-45页 |
| 3.2.4 明胶固定化细胞热稳定性和最适温度 | 第45-46页 |
| 3.2.5 细胞包埋浓度对催化反应的影响 | 第46-47页 |
| 3.2.6 固定化细胞使用量优化 | 第47页 |
| 3.2.7 固定化细胞重复利用稳定性研究 | 第47-48页 |
| 3.2.8 小结与讨论 | 第48页 |
| 3.3 利巴韦林提取与精制 | 第48-56页 |
| 3.3.1 利巴韦林发酵罐催化 | 第48-49页 |
| 3.3.2 转化液蛋白浓度测定 | 第49-50页 |
| 3.3.3 底物鸟苷的去除 | 第50-51页 |
| 3.3.4 利巴韦林提取精制工艺流程 | 第51页 |
| 3.3.5 活性炭脱色 | 第51-54页 |
| 3.3.6 利巴韦林收率的计算 | 第54页 |
| 3.3.7 利巴韦林鉴定及纯度 | 第54-55页 |
| 3.3.8 小结与讨论 | 第55-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 5 展望 | 第57-58页 |
| 6 参考文献 | 第58-64页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第64-65页 |
| 8 致谢 | 第65页 |
