| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 植物与病原菌互作研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1 病原相关分子模式触发的免疫反应 | 第12页 |
| 1.2 效应因子触发的免疫反应 | 第12-13页 |
| 2 水稻稻瘟病介绍 | 第13-14页 |
| 2.1 水稻稻瘟病 | 第13页 |
| 2.2 水稻稻瘟病菌侵染机制 | 第13-14页 |
| 2.3 水稻中稻瘟病致病基因相关研究 | 第14页 |
| 3 锌指结构蛋白 | 第14-15页 |
| 3.1 锌指蛋白分类 | 第14页 |
| 3.2 锌指蛋白作用机理 | 第14-15页 |
| 4 水杨酸信号通路与活性氧参与植物抗病反应 | 第15-16页 |
| 4.1 水杨酸信号传导 | 第15页 |
| 4.2 活性氧参与植物抗病 | 第15-16页 |
| 5 RNA干涉技术原理及应用 | 第16-18页 |
| 5.1 RNAi技术原理 | 第16-17页 |
| 5.2 RNAi技术的应用 | 第17-18页 |
| 5.3 RNAi技术的优点和缺陷 | 第18页 |
| 6 酵母单杂交系统技术 | 第18-19页 |
| 7 论文研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-35页 |
| 1 试验材料 | 第20-22页 |
| 1.1 水稻材料 | 第20页 |
| 1.2 微生物菌株和载体 | 第20页 |
| 1.3 主要生化试剂 | 第20页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 1.5 培养基成分 | 第21-22页 |
| 1.5.1 细菌培养基 | 第21页 |
| 1.5.2 稻瘟病菌培养基 | 第21页 |
| 1.5.3 水稻遗传转化所需的培养基 | 第21-22页 |
| 2 试验方法 | 第22-35页 |
| 2.1 筛选水稻稻瘟病相关的锌指蛋白基因ZFP3 | 第22页 |
| 2.2 ZFP3干涉载体(pANDA-ZFP3Ri)的构建 | 第22-28页 |
| 2.2.1 水稻材料RNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 日本晴RNA反转录为cDNA | 第23页 |
| 2.2.3 ZFP3基因干涉片段扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.4 PCR DNA片段的纯化 | 第24-25页 |
| 2.2.5 ZFP3干涉片段(ZFP3Ri)连接pCR8载体 | 第25页 |
| 2.2.6 大肠杆菌转化 | 第25-26页 |
| 2.2.7 阳性克隆的筛选和鉴定 | 第26页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒提取 | 第26-27页 |
| 2.2.9 质粒测序以及序列分析 | 第27页 |
| 2.2.10 ZFP3干涉载体(pANDA-ZFP3Ri)的构建 | 第27-28页 |
| 2.3 农杆菌介导水稻ZFP3基因干涉表达载体的转化 | 第28-29页 |
| 2.3.1 pANDA-ZFP3Ri对农杆菌的转化 | 第28页 |
| 2.3.2 工程农杆菌的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第29页 |
| 2.4 ZFP3蛋白转录因子验证 | 第29-33页 |
| 2.4.1 ZFP3蛋白质结构分析 | 第29-30页 |
| 2.4.2 ZFP3蛋白亚细胞定位载体(ZFP3-pBI221)构建 | 第30-31页 |
| 2.4.3 ZFP3蛋白亚细胞定位 | 第31-32页 |
| 2.4.4 ZFP3的酵母单杂交载体构建 | 第32-33页 |
| 2.5 转基因植株表型分析 | 第33-35页 |
| 2.5.1 室内滴稻瘟病菌观察病斑 | 第33页 |
| 2.5.2 田间喷施稻瘟病菌观察病斑 | 第33页 |
| 2.5.3 叶鞘注射稻瘟病菌孢悬液显微观察孢子侵染水稻细胞 | 第33-34页 |
| 2.5.4 叶面喷施稻瘟病菌后DAB染色 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-51页 |
| 1 芯片数据分析 | 第35-37页 |
| 1.1 筛选稻瘟病相关基因ZFP3 | 第35-36页 |
| 1.2 鉴定ZFP3芯片数据的可靠性 | 第36-37页 |
| 2 ZFP3蛋白转录因子特性验证 | 第37-40页 |
| 2.1 ZFP3蛋白质结构分析 | 第37-38页 |
| 2.2 水稻ZFP3蛋白定位于细胞核 | 第38-39页 |
| 2.3 ZFP3蛋白结合DNA靶序列EP1S | 第39-40页 |
| 3 ZFP3基因干涉载体的构建 | 第40-42页 |
| 3.1 ZFP3基因干涉片段的扩增 | 第40页 |
| 3.2 ZFP3Ri连接pCR8载体 | 第40-41页 |
| 3.3 ZFP3Ri连接pANDA载体 | 第41-42页 |
| 4 农杆菌介导水稻ZFP3基因干涉片段表达载体的转化及检测 | 第42-44页 |
| 4.1 pANDA-ZFP3Ri转化农杆菌菌液PCR | 第42页 |
| 4.2 ZFP3基因的RNAi转基因植株的获得及检测 | 第42-44页 |
| 4.2.1 ZFP3基因RNAi转基因植株的获得 | 第42-43页 |
| 4.2.2 ZFP3基因RNAi转基因植株的检测 | 第43-44页 |
| 5 ZFP3基因RNAi纯合株系表型分析以及分子生物学检测 | 第44-51页 |
| 5.1 qPCR检测T_2代转基因植株ZFP3表达量 | 第44页 |
| 5.2 T2代转基因植株接种稻瘟病菌抗病性鉴定 | 第44-46页 |
| 5.3 显微观察ZFP3介导下稻瘟病菌侵染水稻机制 | 第46-48页 |
| 5.4 ZFP3影响水稻活性氧积累 | 第48-49页 |
| 5.5 ZFP3负调控于水稻SA信号传导 | 第49-51页 |
| 第四章 讨论 | 第51-53页 |
| 1 ZFP3编码一个受稻瘟病菌诱导的C2H2型锌指蛋白 | 第51页 |
| 2 ZFP3是一个稻瘟病抗性负调控因子 | 第51页 |
| 3 ZFP3影响稻瘟病菌孢子侵染水稻细胞 | 第51-52页 |
| 4 ZFP3参与ROS和SA信号传导 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
