| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 符号说明 | 第9-13页 |
| 综述 | 第13-21页 |
| 1 副猪嗜血杆菌病概述 | 第13-18页 |
| ·副猪嗜血杆菌病 | 第13页 |
| ·副猪嗜血杆菌主要毒力因子概述 | 第13-16页 |
| ·副猪嗜血杆菌病的防治 | 第16-18页 |
| 2 副猪嗜血杆菌血红素摄取机制概述 | 第18-19页 |
| 3 hxu血红素摄取系统概述 | 第19-21页 |
| ·血红素结合蛋白 | 第19页 |
| ·hxu系统 | 第19-20页 |
| ·hxu系统摄取血红素的作用机制 | 第20-21页 |
| 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第一章 HPS hxuCBA基因簇的克隆、鉴定及分析 | 第22-38页 |
| 1 材料 | 第22-23页 |
| ·细菌菌株 | 第22页 |
| ·质粒与载体 | 第22页 |
| ·主要药品及试剂 | 第22页 |
| ·主要培养基 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23-26页 |
| ·hxuC、hxuB、hxuA基因引物的设计 | 第23页 |
| ·M-3复苏培养 | 第23-24页 |
| ·基因组DNA的抽提 | 第24页 |
| ·目的基因扩增 | 第24页 |
| ·PCR产物的鉴定回收纯化 | 第24页 |
| ·重组质粒pMD19-T-C、pMD19-T-B、pMD19-T-A的构建 | 第24页 |
| ·重组克隆质粒的转化、筛选 | 第24-25页 |
| ·克隆阳性产物鉴定 | 第25页 |
| ·HxuC、HxuB、HxuA蛋白的生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 3 结果 | 第26-35页 |
| ·目的基因扩增 | 第26页 |
| ·hxuC、hxuB、hxuA基因的序列分析和HxuC、HxuB、HxuA蛋白的生物信息学分析 | 第26-35页 |
| 4 讨论分析 | 第35-37页 |
| 5 小结 | 第37-38页 |
| 第二章 HPS hxuCBA基因簇的表达及纯化 | 第38-51页 |
| 1 材料 | 第38页 |
| ·细菌菌株 | 第38页 |
| ·质粒与载体 | 第38页 |
| ·主要药品及试剂 | 第38页 |
| ·主要培养基 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-41页 |
| ·重组表达质粒pET39b-C、pET39b-B、pET39b-A的构建 | 第38页 |
| ·重组表达质粒的转化、筛选 | 第38-39页 |
| ·重组表达质粒的鉴定 | 第39页 |
| ·重组蛋白的初步表达鉴定 | 第39页 |
| ·重组蛋白免疫印迹分析 | 第39页 |
| ·重组蛋白表达诱导条件的优化 | 第39-40页 |
| ·重组菌的大量诱导表达 | 第40页 |
| ·表达菌的裂解 | 第40-41页 |
| ·HxuC、HxuB、HxuA蛋白的分离纯化 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-49页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·HxuC、HxuB、HxuA免疫印迹检测 | 第42页 |
| ·重组蛋白表达诱导条件优化 | 第42-46页 |
| ·重组蛋白表达的可溶性及纯化结果鉴定 | 第46-49页 |
| 4 讨论分析 | 第49-50页 |
| 5 小结 | 第50-51页 |
| 第三章 HPS HxuC、HxuB、HxuA蛋白的免疫特性研究 | 第51-63页 |
| 1 材料 | 第51页 |
| ·细菌菌株 | 第51页 |
| ·主要药品及试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51页 |
| ·实验动物 | 第51页 |
| 2 方法 | 第51-53页 |
| ·抗体水平和细胞因子水平检测 | 第51-52页 |
| ·抗血清杀菌试验 | 第52页 |
| ·M-3半数致死量(LD_(50))的测定 | 第52-53页 |
| ·免疫保护性研究 | 第53页 |
| ·组织病理学 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-60页 |
| ·鼠抗HxuC、HxuB、HxuA、HxuCBA、M-3血清的抗体水平测定 | 第53-54页 |
| ·抗血清中细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ测定 | 第54-56页 |
| ·鼠抗HxuC、HxuB、HxuA、HxuCBA、M-3血清杀菌率测定 | 第56-57页 |
| ·HPS M-3株LD_(50)的测定 | 第57-58页 |
| ·hxuCBA基因簇编码蛋白的免疫保护性研究 | 第58页 |
| ·小鼠组织病理学分析 | 第58-60页 |
| 4 讨论分析 | 第60-62页 |
| 5 小结 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70-74页 |
